牛源性成分核酸检测试剂盒（恒温荧光法）

 产品介绍：

检测原理与核心优势

该试剂盒采用的是恒温荧光检测技术（通常指LAMP或类似技术）。

核心原理：针对牛基因组中特有的保守核酸序列设计多组特异性引物。在恒温条件下（通常为63℃），利用链置换DNA聚合酶（如Bst酶）对目标片段进行扩增。随着DNA链的合成，副产物焦磷酸镁沉淀会不断增加，导致反应体系的荧光信号发生改变（如SYTO-9染料嵌合或pH值变化），仪器实时监测荧光信号的变化，从而实现对牛源性成分的定性检测。

自动判读：仪器会根据荧光曲线的拐点（Threshold Time, Tt）自动判读结果，无需人工分析电泳图谱。

主要优势：

操作快速：整个检测过程（包括扩增和检测）通常仅需45-60分钟，无需反复升降温。

高灵敏度：检出限可达0.5%（相对于总DNA），能够检测出极低含量的牛源性成分。

设备简单：仅需恒温荧光检测仪（如Genie II, Dhelix等），无需昂贵的实时荧光定量PCR仪。

防污染：采用闭管检测，反应结束后无需开盖，直接在管内判读结果，大大降低了气溶胶污染的风险。

�� 产品性能指标

根据相关产品信息，该试剂盒通常具备以下指标：

指标项目  性能参数参考

检测范围  2×10³ ~ 1×10⁸ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

最低检测限  0.5% (w/w)

反应时间  45 min

反应温度  63℃

适用仪器  Genie II, Dhelix 1610/3210, ESE Tube Scanner, Deaou-308c等恒温荧光检测仪

适用样本  肉及肉制品、饲料、生物制品、加工食品等。

�� 主要组分与储存

试剂盒通常包含以下组分（以48T规格为例）：

A-牛源-I（反应液）：含有dNTPs、缓冲液、Mg²⁺等。

B-牛源-I（酶液）：含有Bst DNA聚合酶等。

C-牛源-I（荧光染料）：显色液。

阴性对照 (NG-I)：非牛源性DNA或水。

阳性对照 (PG-牛源-I)：含有牛源性基因片段的质粒或标准DNA。

储存条件：所有组分应于 -20℃ 条件下避光保存，运输过程需使用干冰或冰袋。避免反复冻融，使用前需完全解冻并混匀。

�� 标准操作流程

样本处理与DNA提取

采集待检测的肌肉组织、饲料或食品样本。

使用CTAB法或商品化的基因组DNA提取试剂盒，提取样本的基因组DNA作为模板。

试剂准备

将试剂完全解冻，各组分在使用前需涡旋混匀，并瞬时离心。

计算所需反应管数量（待检样品数 + 阴性对照 + 阳性对照）。

反应体系配置

在冰上操作，按说明书比例配制反应体系（通常为25 μL）。

将配制好的反应液分装至0.2 mL PCR管中。

上机扩增与检测

将配置好的反应管放入恒温荧光检测仪中。

设置反应温度为63℃，反应时间为45 min。

仪器实时监测荧光信号变化，并自动判读结果。

结果判读

阳性：荧光曲线呈典型的“S”型增长，且Tt值（Threshold Time）≤ 45 min。

阴性：荧光曲线为直线或轻微斜线，无“S”型扩增曲线，或Tt值无定义。

⚠️ 注意事项

防止污染：实验应严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免气溶胶污染。

操作规范：试剂配制和加样步骤建议在冰上进行，避免酶活性损失。反应液对光敏感，应避光保存和使用。

质控要求：每次实验必须设置阴性对照（无模板）和阳性对照。若阴性对照出现阳性扩增或阳性对照无扩增，则本次实验结果无效。

公司正在出售的产品：

科研领域：

常规PCR试剂盒。

临床诊断：

探针法qPCR试剂盒（如牛白血病病毒，灵敏度100拷贝/反应）。

现场检测：

恒温扩增试剂盒（如LAMP法，90分钟出结果）