大豆内源基因核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

产品介绍：

检测原理与核心优势

该试剂盒采用的是实时荧光定量PCR（qPCR）技术，具体为TaqMan荧光探针法。

核心原理：针对大豆基因组中高度保守的内源基因（如编码凝集素的 Lectin 基因或 Le1 基因）设计特异性引物和TaqMan探针。探针上连接有荧光报告基团（如FAM）和荧光淬灭基团。在PCR扩增过程中，Taq酶的5'→3'外切酶活性会切断与模板结合的探针，使荧光报告基团与淬灭基团分离，从而释放出荧光信号。仪器实时监测荧光信号的累积，从而实现对大豆内源基因的特异性检测。

内参作用：如果大豆内源基因检测为阴性，说明DNA提取失败或样本中不含大豆基因组，此时即使目标基因（如转基因成分）检测为阴性，也不能判定为“非大豆来源”，必须以内参结果为准。

主要优势：

高特异性：引物和探针针对大豆特有序列设计，不会与其他植物（如玉米、水稻、小麦）发生交叉反应。

高灵敏度：检出限通常可达 50拷贝/μL 或 0.1%（相对于总DNA），能够检测出极低含量的植物成分。

快速便捷：整个检测过程（按一个样品计）通常在 2小时 左右完成。

�� 产品性能指标

根据相关产品信息，该试剂盒通常具备以下指标：

指标项目  性能参数参考

检测范围  10 ~ 10⁷ 拷贝/μL (或 2×10³ ~ 1×10⁸ 拷贝/mL)

最低检测限  50 拷贝/μL (或 1×10³ 拷贝/mL)

反应体系  20-25 μL

适用仪器  ABI 7500, Bio-Rad CFX96, Roche 480等实时荧光定量PCR仪

适用样本  大豆植株、大豆种子、豆粕、豆油、饲料、深加工食品（如豆腐、酱油）等。

�� 主要组分与储存

试剂盒通常包含以下组分（以48T规格为例）：

2×qPCR Mix：预混了dNTPs、缓冲液、Mg²⁺、Taq酶等。

引物探针混合液：针对大豆内源基因（如 Lectin 或 Le1）设计的特异性引物和探针。

阳性对照：含有大豆内源基因片段的质粒或标准DNA。

阴性对照：无模板对照（NTC）或超纯水。

储存条件：所有组分应于 -20℃ 条件下避光保存，运输过程需使用干冰或冰袋。避免反复冻融，使用前需完全解冻并混匀。

�� 标准操作流程

样本处理与DNA提取

采集待检测的大豆组织、种子或食品样本。

使用CTAB法或商品化的DNA提取试剂盒，提取样本的基因组DNA作为模板。

试剂准备

将试剂完全解冻，各组分在使用前需涡旋混匀，并瞬时离心。

反应体系配置

在冰上操作，按说明书比例配制反应体系（通常为20-25 μL）：

qPCR Mix: 10-12.5 μL

引物探针混合液: 1-2 μL

模板DNA: 2 μL

无菌水: 补足至体系总体积

上机扩增与检测

将配置好的反应管放入荧光定量PCR仪中。

设置好荧光通道（通常为FAM）、反应程序并运行。

结果判读

阳性：Ct值 < 38，且扩增曲线有明显的指数增长期。说明样本中含有大豆源性成分或DNA提取成功。

阴性：Ct值 ≥ 40 或无Ct值。说明样本中可能不含大豆成分或DNA提取失败。

⚠️ 注意事项

防止污染：实验应严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免气溶胶污染。使用一次性吸头和专用工作服。

操作规范：试剂配制和加样步骤建议在冰上进行，避免酶活性损失。反应液对光敏感，应避光保存和使用。

质控要求：每次实验必须设置阴性对照（无模板）和阳性对照。若阴性对照出现阳性扩增或阳性对照无扩增，则本次实验结果无效。

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防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。