转基因玉米品系CBH351核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

产品介绍：

检测原理与核心优势

该试剂盒采用的是实时荧光定量PCR（qPCR）技术，具体为TaqMan荧光探针法。

核心原理：针对转基因玉米CBH351品系特有的外源基因插入位点序列（即品系特异序列，Event-specific sequence）设计特异性引物和TaqMan探针。探针上连接有荧光报告基团（如FAM）和荧光淬灭基团。在PCR扩增过程中，随着目标DNA的指数级扩增，探针被特异性切断，荧光信号随之释放并被仪器实时捕捉。

双重检测策略：通常采用内标（IC）与目标基因同时检测的策略。内标用于确认DNA提取成功及PCR反应体系中无抑制物，确保结果的准确性。

主要优势：

高特异性：能够精准识别CBH351品系，与非转基因玉米及其他转基因品系（如MON810、Bt176等）无交叉反应。

高灵敏度：检出限可达0.1%（相对于内源基因），能够检测出极低含量的CBH351成分。

符合标准：参照《GB/T 19495.4-2018 转基因产品检测 实时荧光聚合酶链式反应（PCR）检测方法》等国家标准。

�� 产品性能指标

根据相关产品信息，该试剂盒通常具备以下指标：

指标项目  性能参数参考

检测范围  2×10³ ~ 1×10⁸ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

最低检测限  0.1% (相对于内源基因组DNA)

反应体系  20 μL

适用仪器  ABI 7500, Bio-Rad CFX96, Roche 480, Mx3000P, LightCycler等实时荧光定量PCR仪

适用样本  玉米植株、玉米粉、玉米淀粉、饲料、深加工食品等。

�� 主要组分与储存

试剂盒通常包含以下组分（以48T规格为例）：

CBH351 PCR预混液：预混了dNTPs、缓冲液、Mg²⁺等。

引物探针混合物：针对CBH351特异序列设计的引物和探针。

阳性对照：含有CBH351基因片段的质粒或标准DNA。

阴性对照：非转基因玉米DNA或无模板对照（NTC）。

内标（IC）引物探针（可选）：用于检测玉米内源基因（如Invertase基因）。

储存条件：所有组分应于 -20℃ 条件下避光保存，运输过程需使用干冰或冰袋。避免反复冻融，使用前需完全解冻并混匀。

�� 标准操作流程

样本处理与DNA提取

采集待检测的玉米植株、种子或加工食品样本。

参照《GB/T 19495.3-2004》或其他标准方法，提取样本的基因组DNA作为模板。

试剂准备

将试剂完全解冻，各组分在使用前需涡旋混匀，并瞬时离心。

计算所需反应管数量（待检样品数 + 阴性对照 + 阳性对照）。

反应体系配置

在冰上操作，按说明书比例配制20 μL的反应体系。通常包括预混液、引物探针混合物及模板DNA。

上机扩增与检测

将配置好的反应管放入荧光定量PCR仪中。

设置好荧光通道（通常为FAM用于检测目标，VIC/HEX用于检测内标）、反应程序并运行。

结果判读

有效检测：内标（IC）必须为阳性（Ct值 < 35），表明DNA提取成功且无PCR抑制物。

阳性：目标基因Ct值 ≤ 35，且扩增曲线呈典型的“S”型增长。

阴性：目标基因Ct值 > 40 或无Ct值，曲线为直线。

⚠️ 注意事项

防止污染：实验应严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免气溶胶污染。反应结束后严禁开盖，应直接丢弃入密封袋中处理。

操作规范：试剂配制和加样步骤建议在冰上进行，避免酶活性损失。反应液对光敏感，应避光保存和使用。

质控要求：每次实验必须设置阴性对照（无模板）和阳性对照。若阴性对照出现阳性扩增或阳性对照无扩增，则本次实验结果无效。

公司正在出售的产品：

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。