tE9基因核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

产品介绍：

该试剂盒主要用于检测样品中是否含有tE9基因（E9终止子）。tE9是从豌豆中克隆得到的核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶E9的终止子，是转基因植物研究中常用的一种筛选标记基因，广泛存在于转基因玉米、大豆、油菜、棉花等作物中。

 �� 检测原理与核心优势

该试剂盒采用的是实时荧光定量PCR（qPCR）技术，具体为TaqMan荧光探针法。

核心原理：针对tE9基因序列设计特异性引物和TaqMan探针。探针上连接有荧光报告基团（如FAM）和荧光淬灭基团。在PCR扩增过程中，Taq酶的5'→3'外切酶活性会切断与模板结合的探针，使荧光报告基团与淬灭基团分离，从而释放出荧光信号。仪器实时监测荧光信号的累积，从而实现对tE9基因的特异性检测。

高特异性：能够特异性检测转基因植物中的tE9成分，与非转基因植物基因组无交叉反应。

主要优势：

高特异性：探针结合确保了检测结果的准确性。

高灵敏度：检出限通常可达1×10³ 拷贝/毫升，能够检测出极低含量的转基因成分。

即开即用：试剂组分优化，操作简便，减少人为误差。

�� 产品性能指标

根据相关产品信息，该试剂盒通常具备以下指标：

指标项目  性能参数参考

检测范围  1×10³ ~ 1×10⁸ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

最低检测限  1×10³ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

反应体系  25 μL

适用仪器  ABI 7500, Bio-Rad CFX96, Roche 480, 安捷伦 MX3000P/3005P等实时荧光定量PCR仪

适用样本  转基因玉米、大豆、油菜、棉花等农作物植株、种子及加工食品。

�� 主要组分与储存

试剂盒通常包含以下组分（以48T规格为例）：

tE9反应液：预混了dNTPs、缓冲液等，通常为500μL×2管。

酶液：含有Taq DNA聚合酶等，通常为50μL×1管。

tE9阳性质控品：含有tE9基因片段的质粒或DNA，通常为50μL×1管。

阴性质控品：无模板对照（NTC），通常为250μL×1管。

储存条件：所有组分应于 -20℃ 条件下避光保存，有效期通常为12个月。运输过程需使用干冰或冰袋，避免反复冻融。

�� 标准操作流程

样本处理与DNA提取

采集待检测的植物组织、种子或食品样本。

使用CTAB法或商品化的DNA提取试剂盒，提取样本的基因组DNA作为模板。

试剂准备

将试剂完全解冻，各组分在使用前需涡旋混匀，并瞬时离心。

根据待检测样品总数计算所需PCR反应管数（N = 样品数 + 阴性对照 + 阳性对照）。

反应体系配置

在冰上操作，按说明书比例配制反应体系。通常按以下比例混合tE9反应液和酶液，分装到PCR反应管中：

tE9反应液：19 μL

酶液：1 μL

将混合好的反应液分装到PCR反应管中，20 μL/管。

加样

向上述反应管中分别加入5 μL的模板DNA（或阳性质控品、阴性质控品）。

充分混匀，短暂离心。

上机扩增与检测

将配置好的反应管放入荧光定量PCR仪中。

设置好荧光通道（通常为FAM）、反应程序并运行。

结果判读

阳性：Ct值 ≤ 35，且扩增曲线呈典型的“S”型增长。

阴性：Ct值 > 40 或无Ct值，曲线为直线或低于阈值线。

⚠️ 注意事项

防止污染：实验应严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免气溶胶污染。使用一次性吸头和专用工作服。

操作规范：试剂配制和加样步骤建议在冰上进行，避免酶活性损失。反应液对光敏感，应避光保存和使用。

质控要求：每次实验必须设置阴性对照（无模板）和阳性对照。若阴性对照出现阳性扩增或阳性对照无扩增，则本次实验结果无效。

公司正在出售的产品：

高特异性

引物设计基于目标基因保守区域，可区分高度同源序列（如病毒变异株）。

高灵敏度

检测限低至10拷贝/反应，适用于微量样本。

高效扩增

热启动酶（如HotStarTaq）减少非特异性扩增，30分钟内完成40个循环。

防污染设计

UNG酶系统降解残留产物，避免交叉污染。

稳定性提升

冻干预混技术实现常温运输，操作便捷。