GUS基因核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

 产品介绍：

产品性质与用途

检测目标：专门用于检测 GUS基因（β-葡萄糖苷酸酶基因，β-glucuronidase）。

应用背景：GUS基因来源于大肠杆菌（E. coli），在绝大多数植物中没有内源性背景活性。因此，它被广泛用作报告基因（Reporter Gene），用于研究基因表达调控、启动子活性分析以及筛选转基因植株。

主要用途：用于科研领域（仅限于实验室研究，非临床诊断），检测植物组织、细胞或微生物样本中是否含有GUS基因片段。

技术原理：采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术，基于TaqMan荧光探针法。

优势：相比传统的组织化学染色法（X-Gluc法），PCR法具有更高的灵敏度和特异性，能够进行绝对定量或相对定量分析，且不受样本背景颜色干扰。

操作流程与关键参数

根据参考材料，操作通常包括以下步骤：

步骤  操作内容  关键参数/注意事项

1. 样本制备  从待测样本（如植物叶片、组织）中提取基因组DNA。  建议使用配套的植物基因组DNA提取试剂盒，确保DNA纯度。

2. 试剂配制  将PCR反应液（含酶、dNTPs等）与引物探针混合。  需在冰上操作，避光保存反应液。

3. 加样  向反应管中加入DNA模板（通常为5μL）。  必须设置对照：阴性对照（无菌水/NG）和阳性对照（含GUS基因的质粒/PG）。

4. 扩增反应  在荧光定量PCR仪上运行程序。  荧光基团：FAM（通常）

淬灭基团：TAMRA

循环条件：95℃预变性10分钟；随后40个循环（95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟）。

5. 结果判读  分析扩增曲线和Ct值。  阳性：Ct值≤36，扩增曲线呈典型“S”型。

阴性：Ct值≥40或无Ct值（曲线为直线）。

可疑：36<Ct值<40，需重复实验。

性能特点

高特异性：利用特异性探针，仅针对GUS基因片段进行扩增。

灵敏度：能够检测出极低拷贝数的GUS基因。

注意事项：该产品仅可用于科研实验，严禁用于临床诊断或其他非科研用途。不同批号的试剂请勿混用。

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实验操作规范

严格分区操作：试剂配制区、样本处理区、扩增区需物理隔离，防止气溶胶污染。

每次实验需设置阴性对照（无模板DNA）、阳性对照（已知PAT基因样本）及空白对照（仅缓冲液）。

加样时避免过量或不足，推荐低容量反应管以提高热传导率。

污染防控

定期监测实验室空气、加样枪及仪器表面污染，可通过擦拭采样后扩增验证。

扩增产物需在专用区域处理，避免开盖时形成气溶胶污染。