猪链球菌2型/副猪嗜血杆菌/传染性胸膜肺炎放线杆菌（SS-2/HPS/APP）核酸检测试剂盒(三重荧光PCR法)

 产品介绍：

检测原理与核心优势

该试剂盒采用的是三重实时荧光定量PCR（TaqMan探针法）技术。

核心原理：在同一个PCR反应体系中，加入针对猪链球菌2型（SS-2）、副猪嗜血杆菌（HPS）和传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）三种病原体特异性基因片段的三对引物和三条带有不同荧光标记的探针。在PCR扩增过程中，探针被切断，释放出荧光信号。仪器实时监测荧光信号的累积，从而实现对三种病原体的同步、特异性检测和鉴定。

 主要优势：

高通量：一次检测可同时筛查三种常见的猪呼吸道致病菌，提高诊断效率。

高灵敏度：可检测出样本中极低浓度的病原体核酸，远高于传统细菌培养法。

高特异性：引物和探针设计针对特定基因，与其他细菌无交叉反应，结果准确。

快速便捷：整个检测流程（从核酸提取到结果分析）通常可在数小时内完成。

�� 产品性能指标

根据同类产品的性能参数，该试剂盒通常具备以下指标：

指标项目  性能参数参考

检测范围  通常为 2×10³ ~ 1×10⁸ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

最低检测限  约 1×10³ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

反应体系  通常为 20-25 μL 的一管式反应

检测时间  约 1.5 - 2 小时

�� 主要组分与储存

试剂盒通常包含以下组分，具体请以实际产品说明书为准：

三重qPCR反应液：包含dNTPs、反应缓冲液等。

三重qPCR酶混合液：包含DNA聚合酶等。

引物探针混合液：预混了针对SS-2、HPS、APP的特异性引物和探针。

阳性对照：通常为无传染性的、已知浓度的DNA片段，用于实验质控。

阴性对照：通常为无菌水或TE缓冲液。

核酸释放剂（可选）：用于简化样本前处理。

储存条件：所有试剂应于 -20℃ ± 5℃ 条件下避光保存，运输过程需使用干冰或冰袋。应避免反复冻融（通常建议不超过3-5次）。

�� 标准操作流程

样本处理与核酸提取

采集病猪的肺脏、鼻腔分泌物、扁桃体或血液等组织样本。

使用试剂盒自带的或专用的核酸提取试剂，严格按照说明书提取样本中的总DNA。这是决定检测灵敏度的关键步骤。

反应体系配置

在样本制备区，将提取的DNA模板、阳性对照、阴性对照分别与PCR反应液、酶混合液、引物探针混合液在反应管中混合。

充分混匀并离心，避免产生气泡。

上机扩增与检测

将配置好的反应管放入实时荧光PCR仪中。

设置好反应程序（通常包括预变性、扩增循环等阶段）并运行。

结果分析与判读

仪器会自动收集荧光信号并生成扩增曲线。

设定基线和阈值线，读取每个反应管的Ct值（循环阈值）。

�� 结果判读标准

结果判读需同时满足质控要求和样本检测标准。

实验有效性（质控）：

阴性对照：FAM、HEX等所有检测通道的Ct值应为40或无Ct值（即无扩增曲线）。

阳性对照：应在所有目标通道均有扩增，且Ct值应 ≤ 35（具体数值以说明书为准）。

若质控不满足，则本次实验结果无效，需重新检测。

样本结果判读：

阳性（+）：Ct值 < 38，且扩增曲线有明显的指数增长期。

可疑：38 ≤ Ct值 < 40，建议复测或使用其他方法确认。

阴性（-）：Ct值 ≥ 40 或无Ct值。

⚠️ 注意事项

防止污染：PCR检测极其灵敏，为防止假阳性，实验室应严格分区（试剂准备区、样本制备区、PCR扩增区），各区域的物品专用，不得交叉使用。

操作规范：样本采集、运输和处理过程应规范，避免核酸降解导致假阴性。吸取液体时尽量避免产生气泡。

试剂使用：所有试剂使用前需充分融化并混匀。不同批号的试剂不能混用，并在有效期内使用。

废弃物处理：检测后的PCR反应管切忌开盖，应与其他实验废弃物一同进行高压灭菌后丢弃。

用途限制：此类产品通常仅用于科研或兽医临床诊断，不可用于人类。

公司正在出售的产品：

科研领域：

常规PCR试剂盒。

临床诊断：

探针法qPCR试剂盒（如牛白血病病毒，灵敏度100拷贝/反应）。

现场检测：

恒温扩增试剂盒（如LAMP法，90分钟出结果）