赖氨酸（LYS）测试盒

商品属性

测定意义与原理

测定意义

赖氨酸（LYS）是人体必需氨基酸之一，其测定具有重要的临床和科研价值：食品营养检测：LYS含量是评价食品营养价值的重要指标，尤其对于谷物和饲料临床诊断：诊断和监测营养缺乏症、肝脏疾病、肾脏疾病等农业研究：研究植物氮代谢和品种选育生物学研究：了解蛋白质合成和代谢调控机制

测定原理

分光光度法（茚三酮比色法）

LYS与茚三酮在碱性条件下反应，生成蓝紫色化合物，其吸收峰在570nm波长处。通过测定570nm吸光度，即可计算LYS含量。反应式如下： LYS+茚三酮→碱性条件,加热蓝紫色化合物LYS+茚三酮碱性条件,加热蓝紫色化合物

ELISA法

采用双抗体夹心原理，以特异性抗LYS抗体作为捕获抗体，酶标记抗LYS抗体作为检测抗体，通过底物显色反应测定LYS含量。

HPLC法

LYS经衍生化处理后，在高效液相色谱柱上分离，通过紫外检测器或荧光检测器检测，根据保留时间和峰面积定量。

试剂盒组成

分光光度法（茚三酮比色法）试剂盒

组分 规格 作用说明

提取液 液体60mL×1瓶 含Tris-HCl缓冲液（pH8.0），用于提取样本中的LYS

试剂一 液体6mL×1瓶 含茚三酮溶液，反应底物

试剂二 液体6mL×1瓶 含缓冲液，调节反应pH值至碱性条件

试剂三 液体10mL×1瓶 含标准品（LYS），用于建立标准曲线

ELISA法试剂盒

组分 规格 作用说明

包被板 96孔×1块 预包被抗LYS单克隆抗体

酶标抗体 液体6mL×1瓶 含HRP标记抗LYS抗体

标准品 液体1mL×2瓶 含0μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL LYS标准品

底物液 液体6mL×1瓶 含TMB底物液，显色反应试剂

终止液 液体6mL×1瓶 含2mol/L H₂SO₄溶液，终止显色反应

自备仪器与试剂

必备仪器

分光光度法：可见光分光光度计（570nm检测通道）、1mL玻璃比色皿

ELISA法：酶标仪（450nm检测通道）、96孔板、洗板机

HPLC法：高效液相色谱仪、紫外检测器/荧光检测器、C18色谱柱

通用：电子天平、研钵、恒温水浴锅、可调式移液器

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器

自备试剂：蒸馏水/去离子水、乙酸乙酯、三氯乙酸、无水乙醇

样本前处理方法

植物样品取样：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取0.4g匀浆：按植物组织：提取液=0.4g:2.0mL的比例加入提取液匀浆或研磨过滤：用无氨蒸馏水稀释至40mL，混匀，用滤纸过滤，滤液即为LYS粗提液，4℃保存备用保存：若不立即测定，滤液需置于-20℃冷冻保存

食品/饲料样品取样：取粉碎后的食品或饲料样品，准确称取1g提取：加入10mL提取液，振荡提取30min过滤：用滤纸过滤，取滤液备用去蛋白：若样品含有大量蛋白质，加入等体积去蛋白剂，混匀后10000g离心10min，取上清液

血清/尿液样品血清/血浆：直接测定；若浓度过高，用提取液稀释10-20倍尿液：离心去除沉淀，取上清液测定；或用提取液稀释10-20倍

细胞或组织样品细胞处理：收集1×10⁶细胞，加入1mL提取液，超声波破碎（冰浴，功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）组织处理：称取0.1g组织，加入1mL提取液，冰浴匀浆离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

测定操作步骤

分光光度法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零标准曲线绘制：

取标准品用提取液稀释成0、20、40、60、80、100μg/mL系列浓度

取1mL标准溶液于比色管中，加入1mL试剂一和1mL试剂二，混匀

沸水浴加热15min，取出冷却至室温，用蒸馏水定容至10mL

以蒸馏水为参比，测定570nm波长下的吸光度，绘制标准曲线样品测定：

取1mL样品溶液，按标准曲线步骤操作，测定吸光度

根据标准曲线计算样品中LYS含量

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟加样：每孔加入样本或标准品50μL，37℃孵育30min洗板：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤3次，每次浸泡3min酶标抗体：每孔加入酶标抗体50μL，37℃孵育30min洗板：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤5次，每次浸泡3min显色：每孔加入底物液50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度

结果计算方法

单位定义

μg/g 鲜重：每克鲜重样本中LYS的含量

μg/mL：每毫升样本中LYS的含量

mg/L：每升样本中LYS的含量

分光光度法计算公式

LYS含量(μg/g鲜重)=(A测定−A空白)×C标×V总(A标准−A空白)×WLYS含量(μg/g鲜重)=(A标准−A空白)×W(A测定−A空白)×C标×V总

A测定：样本管吸光度值

A空白：空白管吸光度值

A标准：标准管吸光度值

C标：标准品浓度（μg/mL）

V总：样本提取液总体积（mL）

W：样本质量（g）

ELISA法计算公式

LYS含量(ng/mL)=样本OD值−空白OD值标准品OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数LYS含量(ng/mL)=标准品OD值−空白OD值样本OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数

HPLC法计算公式

LYS含量(mg/kg)=样品峰面积×标准品浓度×样品稀释倍数标准品峰面积×样品质量(g)×1000LYS含量(mg/kg)=标准品峰面积×样品质量(g)样品峰面积×标准品浓度×样品稀释倍数×1000

性能指标

指标 茚三酮比色法 ELISA法 HPLC法

线性范围 0~100μg/mL 0~400μg/mL 0~1000μg/mL

最低检测限 ≤1μg/mL ≤0.1μg/mL ≤0.01μg/mL

回收率 90%~110% 95%~105% 98%~102%

批内精密度 CV≤5.0% CV≤3.0% CV≤2.0%

批间精密度 CV≤8.0% CV≤5.0% CV≤3.0%

稳定性 2-8℃保存12个月 2-8℃保存12个月 2-8℃保存12个月

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免LYS分解；-20℃可保存3个月

植物组织需迅速处理，避免LYS氧化

液体样本需避免溶血和细菌污染

试剂使用：

茚三酮溶液需避光保存，避免分解失效

ELISA法试剂需避免反复冻融，用后立即放回2-8℃保存

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

茚三酮比色法反应需沸水浴加热15分钟，确保反应完全

ELISA法需严格控制温育时间和温度，避免影响显色反应

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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