β半乳糖苷酶（βGAL）测试盒

β半乳糖苷酶（βGAL）测试盒

基础信息

测定意义：β-半乳糖苷酶（β-GAL，EC3.2.1.23）广泛存在于动物、植物、微生物中，可催化β-半乳糖苷键水解。在医学中，它是溶酶体贮积病（如GM1神经节苷脂贮积症、粘多糖病ⅣB型）的重要诊断指标；在工业上，可用于乳制品加工（分解乳糖）、基因工程报告基因检测等领域。

测定原理：β-GAL水解对硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（PNPG）生成对硝基苯酚（PNP），后者在405nm波长下有特征吸收峰，通过检测吸光度变化速率计算酶活性。

检测方法：可见分光光度法、微量酶标仪法

产品规格：50管/24样、100管/48样、96孔板/96样

检测范围：0.05-30U/L

灵敏度：0.02U/L

保存条件：2-8℃短期保存（≤1个月），-20℃长期保存（≤6个月），避免反复冻融

试剂盒组成（以可见分光光度法为例）

试剂名称 规格 保存条件 使用说明

提取液 50mL×1瓶 4℃ 直接使用

底物缓冲液 20mL×1瓶 4℃ 直接使用

显色剂 10mL×1瓶 4℃ 直接使用

终止液 50mL×1瓶 4℃ 直接使用

β-GAL标准品 1mL×1支 -20℃ 临用前用提取液稀释至10U/L，再梯度稀释成0、2、4、6、8、10U/L标准系列

一次性比色皿 10个 常温 配套使用

样本处理指南

血清/血浆样本

血清制备：室温自然凝固15-20分钟，2000-3000转/分离心20分钟，取上清液。

血浆制备：使用EDTA或肝素钠抗凝，采血后轻轻颠倒混匀，同上述条件离心取上清。

保存：4℃可保存3天，-20℃可保存1个月，避免反复冻融。

组织样本

称取约0.1g组织，按1:9比例加入预冷的提取液（如0.1g组织+0.9mL提取液），冰浴匀浆。

10000转/分4℃离心10分钟，取上清液待测，剩余样本-20℃保存。

细胞样本

收集细胞沉淀，加入提取液（10^6个细胞/1mL提取液），吹打混匀后超声破碎（冰浴，功率20%，超声3s/间隔10s，重复30次）。

10000转/分4℃离心10分钟，取上清液待测。

尿液样本

取新鲜尿液，2000转/分离心10分钟，取上清液。

若尿液浑浊，需用0.22μm滤膜过滤后再检测。

操作流程

可见分光光度法操作步骤

标准曲线绘制：

取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准系列溶液，补加提取液至1mL。

每管加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

样本检测：

取1mL待测样本（若样本活性过高，需用提取液稀释），加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算样本中β-GAL活性。

微量酶标仪法操作步骤

加样：在96孔板中设置空白孔、标准孔、样本孔，每孔加50μL对应溶液。

反应：每孔加入100μL底物缓冲液，37℃孵育30分钟。

终止：每孔加入50μL终止液。

读数：用酶标仪在405nm波长下测定吸光度，计算酶活性。

注意事项

所有试剂使用前需平衡至室温（20-25℃），使用后立即放回冷藏环境。

反应时间和温度需严格控制，否则会导致结果偏差。

若样本吸光度超出标准曲线范围，需用提取液适当稀释后重新检测，结果乘以稀释倍数。

终止反应后需在30分钟内完成吸光度测定，避免产物分解影响结果。

实验过程中避免交叉污染，所有一次性耗材需灭菌处理。

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