谷氨酸（Glu）含量测试盒

商品属性

测定意义与原理

测定意义

谷氨酸（Glu）是中枢神经系统中含量最高、分布最广的兴奋性神经递质，参与脑内多种生理和病理过程，其含量测定具有重要的临床和科研价值：临床诊断：诊断和监测神经系统疾病，如阿尔茨海默病、帕金森病、癫痫等疾病监测：评估肝肾功能、糖尿病、癌症等疾病的代谢状态生物学研究：了解神经系统功能、蛋白质代谢和细胞能量代谢农业研究：研究植物氮代谢、抗逆机制和品质改良食品检测：评估食品鲜味程度和营养价值

测定原理

分光光度法/比色法

谷氨酸在谷氨酸脱氢酶（GLDH）催化下，与NAD+反应生成α-酮戊二酸和NADH，通过检测340nm处吸光度的变化可反映出谷氨酸含量。反应式如下： Glu+NAD++H2O→GLDHα-酮戊二酸+NADH+NH4+Glu+NAD++H2OGLDHα-酮戊二酸+NADH+NH4+

ELISA法

采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验：预先包被谷氨酸（Glu）捕获抗体的包被微孔中加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体经过温育并彻底洗涤，用底物TMB显色TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色颜色深浅与样品中的谷氨酸（Glu）呈正相关，用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)计算样品浓度

HPLC法

Glu经衍生化处理后，在高效液相色谱柱上分离，通过紫外检测器或荧光检测器检测，根据保留时间和峰面积定量。

试剂盒组成

分光光度法/比色法试剂盒

组分 规格 作用说明

提取液 液体100mL×1瓶 含Tris-HCl缓冲液（pH8.0），用于提取样本中的Glu

试剂一 液体6mL×1瓶 含NAD+溶液，辅酶，用于检测Glu含量

试剂二 液体6mL×1瓶 含谷氨酸脱氢酶（GLDH）溶液，催化剂，用于催化Glu氧化

试剂三 液体25mL×1瓶 含缓冲液，调节反应pH值至碱性条件

试剂四 液体6mL×1瓶 含标准品（Glu），用于建立标准曲线

ELISA法试剂盒

组分 规格 作用说明

包被板 96孔×1块 预先包被谷氨酸（Glu）捕获抗体

酶标试剂 液体6mL×1瓶 含HRP标记的检测抗体，用于检测谷氨酸（Glu）

标准品 0.3mL×6管 含谷氨酸（Glu）标准品（0、2、4、8、16、32、64U/L）

样本稀释液 10mL×1瓶 用于稀释样本和标准品

显色剂A液 6mL×1瓶 含过氧化氢溶液

显色剂B液 6mL×1瓶 含TMB溶液

终止液 6mL×1瓶 含硫酸溶液

20倍浓缩洗涤液 20mL×1瓶 用于洗涤酶标板

自备仪器与试剂

必备仪器

分光光度法/比色法：紫外分光光度计/酶标仪（340nm检测通道）、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

ELISA法：酶标仪（450nm检测通道）、96孔板、37℃恒温箱、洗板机

通用：低温离心机（≥10000g）、恒温水浴锅、可调式移液器、电子天平

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、三氯乙酸

样本前处理方法

动植物组织样本取样：称取约0.2-0.5g组织，用蒸馏水洗净表面杂质，用滤纸吸干匀浆：按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例，进行冰浴匀浆离心：10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测稀释：若Glu浓度过高，用提取液稀释1-10倍后测定

细胞样本收集：收集1×10⁶细胞，加入1mL提取液破碎：冰浴超声波破碎（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）离心：10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

血清/尿液样本血清：取0.1mL血清，加入0.5mL无水乙醇使蛋白质沉淀，8000g 4℃离心5min，取上清，氮吹或沸水浴挥发干乙醇，冷却后加入0.2mL 50%异丙醇溶解待测尿液：取1mL尿液，加入0.5mL无水乙醇使蛋白质沉淀，8000g 4℃离心5min，取上清，直接测定或稀释后测定

测定操作步骤

分光光度法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零标准曲线绘制：

将标准品稀释成0、20、40、60、80、100μmol/L系列浓度

取100μL标准溶液于比色管中，加入100μL试剂一和100μL试剂二，混匀

室温反应15min，加入100μL试剂三，混匀，室温放置5min

测定340nm波长下的吸光度，绘制标准曲线样品测定：

取100μL样品溶液，按标准曲线步骤操作，测定吸光度

根据标准曲线计算样品中Glu含量

ELISA法操作试剂准备：

将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

标准品按说明书稀释成0、2、4、8、16、32、64U/L系列浓度加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加温育：

除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔

37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：

弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：

每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：

每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度

结果计算方法

单位定义

μmol/g 鲜重：每克鲜重样本中Glu的含量

μmol/L：每升样本中Glu的含量

mg/L：每升样本中Glu的含量（ELISA法）

分光光度法计算公式

Glu含量(μmol/g鲜重)=(A测定−A空白)×C标×V总(A标准−A空白)×WGlu含量(μmol/g鲜重)=(A标准−A空白)×W(A测定−A空白)×C标×V总

A测定：样本管吸光度值

A空白：空白管吸光度值

A标准：标准管吸光度值

C标：标准品浓度（μmol/mL）

V总：样本提取液总体积（mL）

W：样本质量（g）

ELISA法计算公式

Glu含量(mg/L)=样本OD值−空白OD值标准品OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数Glu含量(mg/L)=标准品OD值−空白OD值样本OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数

HPLC法计算公式

Glu含量(μmol/g)=样品峰面积×标准品浓度×样品稀释倍数标准品峰面积×样品质量(g)Glu含量(μmol/g)=标准品峰面积×样品质量(g)样品峰面积×标准品浓度×样品稀释倍数

性能指标

指标 分光光度法/比色法 ELISA法 HPLC法

线性范围 0~100μmol/L 0~64mg/L 0~1000μmol/L

最低检测限 ≤0.1μmol/L ≤0.1mg/L ≤0.01μmol/L

回收率 90%~110% 90%~110% 95%~105%

批内精密度 CV≤5.0% CV≤10% CV≤2.0%

批间精密度 CV≤8.0% CV≤15% CV≤3.0%

稳定性 2-8℃保存12个月 2-8℃保存6个月 2-8℃保存12个月

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免Glu分解；-20℃可保存3个月

植物组织需迅速处理，避免Glu氧化

液体样本需避免溶血和细菌污染

试剂使用：

NAD+溶液需-20℃避光保存，避免分解失效

ELISA法试剂需避免反复冻融，用后立即放回2-8℃保存

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

分光光度法反应温度需严格控制在室温，反应时间15分钟

ELISA法需严格控制温育时间和温度，避免影响显色反应

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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