β葡萄糖苷酶（βGC）/纤维二糖酶测试盒 新品

β葡萄糖苷酶（βGC）/纤维二糖酶测试盒

基本信息

测定意义：β-GC(EC3.2.1.21)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化β-糖苷键水解，具有多方面生理作用：在纤维素的糖化作用中，β-GC负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态，从而产生香味；β-GC能够水解植物体内野黑樱苷，释放HCN，从而防止昆虫取食。

测定原理：β-GC分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GC活性。

检测方法：可见分光光度法、微量法

产品规格：50管/24样、100管/96样

自备仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

注意事项

严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

在储存和温育时避免强光直接照射。

平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

不能使用过期产品。

如果可能传播，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

样本处理及要求

组织样品

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液)，进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

土壤样品

直接或稀释使用清亮无色中性液体样品，体积可达2.000ml。

过滤混浊溶液。

除去样品中的CO₂(通过过滤)。

通过加氢氧化钾或氢氧化钠将酸性样品的PH值调至8.0。

调整酸性浅色样品的PH值至8.0，孵育约15分钟。

用空白样品做对照测定有色样品(如有必要调整PH值至8.0)。

用PVPP(聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺处理深色未经稀释或体积更大的样品。

压碎、搅匀固体或半固体样品，用水溶解提取。

用Carrez试剂将含有蛋白质的样品去蛋白。

含脂肪的样品用热水提取。

通用要求

样本最好无溶血、脂血、黄疸的现象，组织样本需将血液洗净擦干后再进行称重处理。

样本处理后最好尽快进行检测，且保存于冰盒之上，待测。

样本需澄清，若不澄清，需离心后取上清进行检测（特殊指标除外）。

样本值应在试剂盒线性范围内，若超过线性范围，需稀释后再进行检测，若低于检测范围，需增加样本浓度后进行检测。

请尽早检测，2-8℃保存一天；需更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存。如需周期收集样本，请将样本及时分装标号后，置-20℃或-70℃保存。

操作步骤（可见分光光度法）

标准曲线的绘制

以组织样本为例，参照组织样本检测方法，取5个离心管，按下表加入下列试剂：

试剂 空白管 标准管1 标准管2 标准管3 标准管4 标准管5

标准溶液（mL） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0

提取液（mL） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0

试剂C（mL） 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5

试剂D（mL） 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5

标准品含量（μmol） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0

混匀后，每管加1mL双蒸水，快速混匀，置于沸水浴中煮沸50min，快速放至冰水中冷却，3000r/min、4℃离心15min，取上清于532nm读数。以标准品含量（μmol）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

样本检测

组织样本：取0.25mL组织匀浆液，加入到1.5mL试剂C溶液中，混匀后，加入0.3mL试剂D，混匀后于沸水浴中煮沸40min，快速放入冰水中冷却，3000r/min、4℃离心15min，取上清于532nm读数。

培养细胞样本：取0.2mL细胞裂解液，加入1.5mL试剂C和1.5mL试剂D，混匀，每管加入1mL双蒸水，快速混匀。置于沸水浴中煮沸50min，快速放入冰水中冷却，3000r/min、4℃离心15min，取上清于532nm读数。

计算结果

根据样本的吸光度，在标准曲线上查得对应的β-GC含量（μmol），再根据样本的稀释倍数和取样量，计算出样本中β-GC的活性。

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