半胱氨酰亚砜裂解酶（CSL)测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

半胱氨酰亚砜裂解酶（CSL），又称为蒜氨酸酶（Alliinase），广泛存在于百合科葱属（如大蒜和洋葱）、十字花科芸薹属（如卷心菜、菜花、西兰花）以及豆科中的合金欢属中，其测定具有重要的临床和科研价值：食品安全研究：CSL是内源性甲醛生成的关键酶之一，测定CSL活性对于研究食品安全具有重要意义农业研究：葱属植物中CSL活性与辛辣气味密切相关，可作为品质鉴定指标生物学研究：了解植物抗逆机制和代谢调控医药开发：蒜氨酸酶与蒜素生成密切相关，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等功效

测定原理

CSL催化S-甲基-L-半胱氨酸亚砜反应产生丙酮酸，与2,4-二硝基苯肼反应，在碱性条件下显棕红色，在510nm下有特征吸收峰。通过测定吸光度，即可计算CSL酶活力。反应式如下： S-甲基-L-半胱氨酸亚砜+H2O→CSL丙酮酸+NH3+CH3SHS-甲基-L-半胱氨酸亚砜+H2OCSL丙酮酸+NH3+CH3SH 丙酮酸+2,4-二硝基苯肼→碱性条件2,4-二硝基苯腙(棕红色)丙酮酸+2,4-二硝基苯肼碱性条件2,4-二硝基苯腙(棕红色)

试剂盒组成

可见分光光度法试剂盒

组分 规格 作用说明

提取液 液体60mL×1瓶 含Tris-HCl缓冲液（pH8.0），用于提取样本中的CSL

试剂一 粉剂×1瓶 含S-甲基-L-半胱氨酸亚砜，CSL反应底物，临用前加入2mL水溶解

试剂二 粉剂×1瓶 含2,4-二硝基苯肼，显色剂，临用前加入10mL水溶解

试剂三 液体15mL×1瓶 含氢氧化钠溶液，碱性反应条件

试剂四 液体6mL×1瓶 含稳定剂，保持CSL活性

试剂五 液体30mL×1瓶 含标准品（CSL），用于建立标准曲线

ELISA法试剂盒

组分 规格 作用说明

包被板 96孔×1块 预包被抗CSL抗体

酶标抗体 液体6mL×1瓶 含HRP标记抗CSL抗体

标准品 液体1mL×2瓶 含0U/L、20U/L、50U/L、100U/L、200U/L、400U/L CSL标准品

样本稀释液 液体20mL×1瓶 含PBS缓冲液（pH7.4），用于稀释样本

洗涤液 液体20mL×1瓶 含0.05% Tween-20的PBS缓冲液，用于洗板

底物液 液体10mL×1瓶 含TMB底物液，用于显色反应

终止液 液体10mL×1瓶 含2mol/L H₂SO₄溶液，用于终止显色反应

自备仪器与试剂

必备仪器

可见分光光度法：可见光分光光度计（510nm检测通道）、1mL玻璃比色皿

微量法：酶标仪（510nm检测通道）、微量石英比色皿/96孔板

通用：低温离心机（≥10000g）、恒温水浴锅、可调式移液器、电子天平

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、三氯乙酸

样本前处理方法

动植物组织样本取样：称取约0.1g组织，用蒸馏水洗净，滤纸吸干，剪碎匀浆：加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，4℃浸提40min离心：12000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测稀释：若CSL活性过高，用提取液稀释1-10倍后测定

微生物/细胞样本收集：收集1×10⁶细胞或1g湿重微生物，加入1mL提取液破碎：冰浴超声波破碎（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）提取：4℃浸提40min，12000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测

液体样本（血清/尿液/发酵液）血清/血浆：直接测定；若浓度过高，用样本稀释液稀释10-20倍尿液：离心去除沉淀，取上清液测定；或用样本稀释液稀释10-20倍发酵液：过滤去除菌体，取滤液测定；或用样本稀释液稀释10-100倍

测定操作步骤

可见分光光度法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至510nm，蒸馏水调零标准曲线绘制：

取标准品用提取液稀释成0、20、40、60、80、100μmol/mL系列浓度

取100μL标准溶液于EP管中，加入50μL试剂一和50μL试剂二，混匀

37℃水浴反应20min，取出冷却至室温，加入200μL试剂三和100μL试剂四，混匀

室温放置10min，加入500μL试剂五，混匀，室温放置5min

测定510nm波长下的吸光度，绘制标准曲线

回归方程：y=1.4626x+0.0027，R²=0.9993（x为标准品浓度μmol/mL）样品测定：

取100μL样品溶液，按标准曲线步骤操作，测定吸光度

根据标准曲线计算样品中CSL活性

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟加样：每孔加入样本或标准品50μL，37℃孵育30min洗板：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤3次，每次浸泡3min酶标抗体：每孔加入酶标抗体50μL，37℃孵育30min洗板：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤5次，每次浸泡3min显色：每孔加入底物液50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度

结果计算方法

单位定义

U/L：每升样本中每分钟催化生成1μmol丙酮酸的酶量

U/g 鲜重：每克鲜重样本每分钟催化生成1μmol丙酮酸的酶量

U/mgprot：每毫克组织蛋白每分钟催化生成1μmol丙酮酸的酶量

可见分光光度法计算公式

CSL活性(U/L)=(A测定−A空白)+0.00271.4626×t×稀释倍数CSL活性(U/L)=1.4626×t(A测定−A空白)+0.0027×稀释倍数

A测定：样本管吸光度值

A空白：空白管吸光度值

t：反应时间（min）

ELISA法计算公式

CSL含量(ng/mL)=样本OD值−空白OD值标准品OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数CSL含量(ng/mL)=标准品OD值−空白OD值样本OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数

按蛋白含量计算

CSL活性(μmol/min/mgprot)=(ΔA−0.0027)1.4626×Cpr×tCSL活性(μmol/min/mgprot)=1.4626×Cpr×t(ΔA−0.0027)

ΔA：510nm处吸光度变化值

Cpr：蛋白浓度（mg/mL）

t：反应时间（min）

按样本质量计算

CSL活性(μmol/min/g鲜重)=(ΔA−0.0027)×V总1.4626×W×tCSL活性(μmol/min/g鲜重)=1.4626×W×t(ΔA−0.0027)×V总

ΔA：510nm处吸光度变化值

V总：反应体系总体积（mL）

W：样本质量（g）

t：反应时间（min）

性能指标

指标 可见分光光度法 ELISA法 速率法

线性范围 0~200U/L 0~480U/L 0~200U/L

最低检测限 ≤0.1U/L ≤0.1mU/L ≤0.1U/L

回收率 90%~110% 90%~110% 95%~105%

批内精密度 CV≤5.0% CV≤3.0% CV≤5.0%

批间精密度 CV≤8.0% CV≤5.0% CV≤8.0%

稳定性 2-8℃保存12个月 2-8℃保存12个月 2-8℃保存12个月

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免CSL失活；-20℃可保存3个月

血清样本需避免溶血和脂血，避免干扰测定结果

组织样本需洗净表面血液，避免污染

香菇类样本活性较大，可能需要稀释80-100倍

试剂使用：

酶试剂需避免反复冻融，用后立即放回-20℃保存

显色剂需临用前配制，避光保存

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

分光光度法反应温度需严格控制在37℃，反应时间20分钟

ELISA法需严格控制温育时间和温度，避免影响显色反应

若吸光度值超过2，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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