纤维素酶（CL）/羧甲基纤维素酶测试盒 新品

纤维素酶（CL）/羧甲基纤维素酶测试盒

测定意义

CL（EC 3.2.1.4）广泛存在于细菌、真菌和动物体内，能催化纤维素降解，在医药、食品、棉纺、环保及可再生资源利用等领域应用广泛。

测定原理

主流采用两种方法：蒽酮比色法：CL催化羧甲基纤维素钠降解产生还原糖，还原糖与蒽酮试剂反应生成蓝绿色复合物，在620nm处有最大吸收峰，通过测定吸光值计算酶活性。3,5-二硝基水杨酸法：CL催化纤维素降解产生还原糖，还原糖与3,5-二硝基水杨酸试剂反应生成棕红色复合物，在550nm处有最大吸收峰，通过测定吸光值计算酶活性。

试剂组成与配制

蒽酮比色法试剂盒

试剂名称 规格 保存条件 配制方法

提取液 50mL/100mL液体 4℃直接使用 直接使用

试剂一 6mL液体 4℃直接使用 直接使用

试剂二 40mL液体 4℃直接使用 直接使用

试剂三 粉剂×1瓶 4℃ 临用前加入5mL蒸馏水和45mL浓硫酸，充分溶解后待用

3,5-二硝基水杨酸法试剂盒

试剂名称 规格 保存条件 配制方法

提取液 50mL液体 4℃直接使用 直接使用

试剂一 4mL液体 4℃直接使用 直接使用

试剂二 10mL液体 4℃直接使用 直接使用样本测定准备

1. 细菌或培养细胞

收集细菌或细胞到离心管，离心弃上清

按细菌/细胞数量（10⁴个）:提取液体积（mL）=500~1000:1的比例加入提取液

冰浴超声波破碎（功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）

8000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测

2. 组织样本

按组织质量（g）:提取液体积（mL）=1:5~10的比例加入提取液

冰浴匀浆

8000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测

3. 血清(浆)样本

无需处理，直接检测

操作步骤

蒽酮比色法（分光光度计法）分光光度计预热30min，调节波长至620nm，蒸馏水调零加样（EP管中）： |试剂名称|对照管|测定管| | ---- | ---- | ---- | |样本|50μL|50μL| |试剂一|-|90μL| |试剂二|370μL|370μL| |蒸馏水|180μL|90μL|37℃振荡反应1h，90℃水浴15min（盖紧防止水分散失）冷却后8000g 25℃离心10min，取上清得糖化液取糖化液140μL，加入试剂三260μL，混匀后90℃水浴10min冷却后测620nm处吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管

3,5-二硝基水杨酸法分光光度计预热30min，调节波长至550nm，蒸馏水调零加样（EP管中）： |试剂名称|对照管|测定管| | ---- | ---- | ---- | |样本|50μL|50μL| |试剂一|-|90μL| |试剂二|370μL|370μL| |蒸馏水|180μL|90μL|40℃准确水浴30min，取出后立即沸水浴15min冷却后测550nm处吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管

结果计算

蒽酮比色法

1. 微量石英比色皿测定

血清(浆)CL活力（μg/min/mL）=39.8×(ΔA+0.0462)

组织CL活力（μg/min/mg prot）=39.8×(ΔA+0.0462)÷Cpr（Cpr为样本蛋白质浓度，mg/mL）

组织CL活力（μg/min/g鲜重）=39.8×(ΔA+0.0462)÷W（W为样本质量，g）

细菌/细胞CL活力（μg/min/10⁴cell）=0.0796×(ΔA+0.0462)

2. 96孔板测定

血清(浆)CL活力（μg/min/mL）=79.6×(ΔA+0.0462)

组织CL活力（μg/min/g鲜重）=79.6×(ΔA+0.0462)÷W

3,5-二硝基水杨酸法

根据标准曲线计算还原糖含量，再根据酶活力定义计算酶活性： 酶活力单位定义：每mL血清(浆)每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位；每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位；每g组织每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。

注意事项

试剂盒从冷藏环境取出后，应在室温平衡15-30分钟后方可使用浓洗涤液如有结晶析出，可在水浴中加温助溶，不影响结果加样过程应使用校准过的加样器，尽量缩短加样时间酶标包被板开封后未用完的板条应装入密封袋中保存实验过程中应严格控制反应时间和温度，确保结果准确性正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

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