还原糖含量测试盒

还原糖含量测试盒

测定意义

还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，植物体内主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等。这类物质不仅是呼吸作用的主要底物，也是合成蔗糖、淀粉和纤维素等生物大分子的基础原料，其含量变化可直接反映生物体的代谢状态。

测定原理

在加热条件下，碱性溶液中的3,5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成棕红色的氨基化合物。该产物在540nm波长处有特征吸收峰，且在一定浓度范围内，还原糖含量与吸光度值呈线性正相关。通过绘制标准曲线，即可计算出样品中的还原糖含量。

自备仪器与用品

可见分光光度计/酶标仪

恒温水浴锅（可稳定控制100℃）

可调式移液器（10-1000μL）及配套枪头

1mL玻璃比色皿/96孔板

研钵/组织匀浆器

高速离心机（可选，用于样本前处理）

蒸馏水/去离子水样本前处理方法

1. 植物组织样本

称取0.1g新鲜植物组织（叶片、根系、果实等），置于研钵中

加入1mL提取液，冰浴研磨成匀浆

转移至离心管，8000rpm离心10min，取上清液待测

2. 微生物/细胞样本

收集1×10^8个细胞，加入1mL提取液

超声破碎（功率200W，工作3s停5s，共30次）

8000rpm离心10min，取上清液待测

3. 体液样本

直接取血清/血浆样本，无需前处理，若浓度过高可适当稀释

操作步骤

1. 标准曲线绘制

管号 标准溶液（μL） 蒸馏水（μL） 还原糖浓度（mg/mL）

0 0 200 0

1 20 180 0.1

2 40 160 0.2

3 60 140 0.3

4 80 120 0.4

5 100 100 0.5

向各管加入200μL DNS试剂，沸水浴加热5min，立即冰水浴冷却至室温，再加入600μL蒸馏水，摇匀后于540nm波长处测定吸光度值。以吸光度为纵坐标，还原糖浓度为横坐标绘制标准曲线。

2. 样品测定

取200μL待测样品（若浓度过高需适当稀释）

加入200μL DNS试剂，沸水浴加热5min

冰水浴冷却后加入600μL蒸馏水，摇匀

于540nm波长处测定吸光度值，根据标准曲线计算还原糖浓度

结果计算

还原糖含量（mg/g鲜重）= (C×V×N) / W

C：从标准曲线中查得的还原糖浓度（mg/mL）

V：提取液总体积（mL）

N：样品稀释倍数

W：样本鲜重（g）

注意事项

正式测定前建议取2-3个预期差异较大的样本做预测定，确定合适的稀释倍数沸水浴时间需严格控制5min，过长或过短都会影响结果准确性若溶液倒入比色皿后出现浑浊，建议将样品8000rpm离心5min后再测定若分光光度计数据波动较大，可预热仪器10min后再进行测定

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