糖原含量测试盒

糖原含量测试盒

测定意义与原理

测定意义

糖原是动物体内重要的储能多糖，主要存在于肝脏和肌肉中，参与能量代谢调节，维持血糖稳定；在植物和微生物中也作为储能物质存在。糖原含量检测可用于：代谢研究：分析生物体能量代谢状态疾病诊断：辅助诊断糖原累积症、糖尿病等代谢性疾病营养评估：评估生物体营养状况和能量储备药物研发：筛选影响糖原代谢的药物

测定原理

蒽酮比色法：糖原在浓硫酸作用下脱水生成羟甲基糠醛，与蒽酮试剂反应生成蓝绿色化合物，在620nm波长有特征吸收峰，吸光值与糖原含量成正比

苯酚硫酸法：糖原在浓硫酸作用下水解为单糖，与苯酚反应生成橙色化合物，在490nm波长有特征吸收峰，吸光值与糖原含量成正比

酶法：糖原在糖原磷酸化酶作用下分解为葡萄糖-1-磷酸，进一步转化为葡萄糖-6-磷酸，通过葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联反应生成有色化合物，吸光值与糖原含量成正比

试剂盒组成

蒽酮比色法试剂盒

组分 规格 作用说明

提取液 液体100mL×1瓶,4℃保存 用于提取样本中的糖原

试剂一 液体50mL×1瓶,4℃保存 含蒽酮试剂，显色剂；临用前需与浓硫酸按比例混合，现配现用

试剂二 液体100mL×1瓶,4℃保存 含浓硫酸，水解糖原

标准品 粉剂10mg×1支,-20℃保存 含糖原标准品，临用前用1mL蒸馏水溶解，溶液浓度为10mg/mL

酶法试剂盒

组分 规格 作用说明

提取液 液体100mL×1瓶,4℃保存 用于提取样本中的糖原

试剂一 液体20mL×1瓶,-20℃保存 含糖原磷酸化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，分解糖原并生成NADPH

试剂二 液体10mL×1瓶,-20℃保存 含反应缓冲液，维持反应体系pH稳定

标准品 粉剂10mg×1支,-20℃保存 含糖原标准品，临用前用1mL蒸馏水溶解，溶液浓度为10mg/mL

自备仪器与试剂

必备仪器

蒽酮比色法/苯酚硫酸法：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿/96孔板、研钵、电子天平

酶法：荧光分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿/96孔板、研钵、电子天平

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水

样本前处理方法

动物组织样本取样：按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),冰浴中匀浆提取：8000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测

植物组织样本取样：称取约0.1g样本,加入1mL提取液,冰浴匀浆提取：8000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测

微生物、细胞样本收集：先收集微生物或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照微生物或细胞数量(10⁴个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例加入提取液破碎：超声波破碎微生物或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次)离心：8000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测

血清、血浆样本处理：直接检测

测定操作步骤

蒽酮比色法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上,调节波长至620nm,蒸馏水调零试剂配制：临用前取1份蒽酮试剂与4份浓硫酸混合,即为工作液,现配现用标准曲线绘制：将10mg/mL糖原标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度,分别取100μL各浓度标准液,加入400μL工作液,混匀,95℃水浴5min,流水冷却后,测定620nm处吸光值,绘制标准曲线样本测定：取100μL样本上清液,加入400μL工作液,混匀,95℃水浴5min,流水冷却后,测定620nm处吸光值

酶法操作仪器预热：荧光分光光度计预热30min以上,调节激发波长340nm,发射波长460nm,蒸馏水调零试剂配制：临用前取1份试剂一与9份试剂二混合,即为工作液,现配现用标准曲线绘制：将10mg/mL糖原标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度,分别取100μL各浓度标准液,加入900μL工作液,混匀,37℃水浴30min,测定荧光强度,绘制标准曲线样本测定：取100μL样本上清液,加入900μL工作液,混匀,37℃水浴30min,测定荧光强度

结果计算方法

单位定义

mg/g FW：每克鲜重样本中含有的糖原毫克数

mg/mL：每毫升样本中含有的糖原毫克数

计算公式

糖原含量(mg/g FW)=C×V总×nW×V样糖原含量(mg/g FW)=W×V样C×V总×n 糖原含量(mg/mL)=C×nV样糖原含量(mg/mL)=V样C×n

C：由标准曲线计算得出的样本中糖原浓度（mg/mL）

V总：样本提取液总体积（mL）

V样：测定时加入样本体积（mL）

n：样本稀释倍数

W：样本鲜重（g）

性能指标

指标 蒽酮比色法 酶法

线性范围 0~1mg/mL 0~1mg/mL

最低检测限 ≤0.01mg/mL ≤0.001mg/mL

回收率 90%~110% 95%~105%

批内精密度 CV≤2.0% CV≤1.0%

批间精密度 CV≤5.0% CV≤3.0%

稳定性 4℃保存6-12个月 4℃保存6-12个月

注意事项

样本处理：

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

样本需新鲜制备,避免糖原降解；-20℃可保存3个月

组织样本需冰浴匀浆,确保糖原完全提取

沸水浴时间需严格控制在5min,避免糖原过度水解

试剂使用：

工作液需临用前配制,避免氧化失效

不同批号试剂不能混用,需重新绘制标准曲线

标准品需4℃保存,避免反复冻融

浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需小心

测定过程：

显色反应时间需严格控制,确保反应完全

显色后需立即测定,避免颜色褪去

若吸光度值超出线性范围,需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和标准品对照

定期校准仪器,确保检测结果准确性

若结果偏差较大,需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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