γ氨基丁酸(GABA)测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

γ-氨基丁酸（GABA）是一种天然活性成分，广泛分布于动植物体内，是中枢神经系统中有效的抑制性神经递质，具有多种重要的生理功能：医药领域：降血压、增进脑活力、营养神经细胞、保持神经安定、促进生长激素分泌和保肝利肾食品领域：作为功能性食品添加剂，具有改善睡眠、缓解焦虑、抗疲劳等作用农业领域：参与植物抗逆反应，调节植物生长发育科研领域：研究神经递质代谢、植物生理机制和微生物发酵调控

测定原理

分光光度法/微量法

GABA与苯酚和次氯酸钠反应，产生蓝绿色产物，在640nm或570nm有最大吸光值。通过测定吸光度，即可计算GABA含量。反应式如下： GABA+苯酚+次氯酸钠→碱性条件蓝绿色产物GABA+苯酚+次氯酸钠碱性条件蓝绿色产物

酶联免疫吸附法（ELISA）

采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验：往预先包被γ-氨基丁酸（GABA）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体经过温育并彻底洗涤加入底物TMB显色，颜色深浅与样品中的γ-氨基丁酸（GABA）呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样本浓度

高效液相色谱（HPLC）法

GABA经衍生化处理后，在高效液相色谱柱上分离，通过紫外检测器或荧光检测器检测，根据保留时间和峰面积定量。

试剂盒组成

分光光度法试剂盒

组分 规格 作用说明

提取液 液体60mL×1瓶 含提取缓冲液，用于提取样本中的GABA

试剂二 液体8mL×1瓶 含苯酚溶液，反应底物

试剂三 液体10mL×1瓶 含次氯酸钠溶液，反应底物

试剂四 液体35mL×1瓶 含氢氧化钠溶液，碱性反应条件

标准品 液体1mL×1支 含100μmol/mL GABA标准品，用于建立标准曲线

ELISA法试剂盒

组分 规格 作用说明

包被板 96孔×1板 预包被抗GABA单克隆抗体

酶标抗体 液体6mL×1瓶 含HRP标记的抗GABA多克隆抗体

标准品 液体1mL×2瓶 含GABA标准品（0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6ng/mL）

样本稀释液 液体20mL×1瓶 含PBS缓冲液（pH7.4），用于稀释样本

洗涤液 液体20mL×1瓶 含0.05% Tween-20的PBS缓冲液，用于洗涤板孔

底物液 液体6mL×1瓶 含TMB底物液，用于显色反应

终止液 液体6mL×1瓶 含2mol/L H₂SO₄溶液，用于终止显色反应

自备仪器与试剂

必备仪器

分光光度法/微量法：可见分光光度计（640nm/570nm检测通道）/酶标仪、恒温水浴锅、可调式移液器、研钵、96孔板/1mL玻璃比色皿

ELISA法：酶标仪（450nm检测通道）、洗板机、恒温箱

HPLC法：高效液相色谱仪、紫外检测器/荧光检测器、C18色谱柱

通用：电子天平、离心机、漩涡混匀器、研钵/组织匀浆器

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、EP管、滤纸、0.22μm微孔滤膜

自备试剂：蒸馏水/去离子水、无水乙醇、氢氧化钠、苯酚、次氯酸钠

样本前处理方法

动植物组织样本取样：称取约0.1g样本，用蒸馏水洗净，滤纸吸干，剪碎提取：加入1mL提取液，充分匀浆，转移至EP管，95℃水浴2h（盖紧，防止水分散失）冷却：取出后立即置于冰上冷却离心：8000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测稀释：若GABA浓度过高，用提取液稀释1-10倍后测定

微生物/细胞样本收集：收集1×10⁶细胞或1g湿重微生物，加入1mL提取液破碎：冰浴超声波破碎（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）提取：95℃水浴2h，取出后立即置于冰上冷却离心：8000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测

液体样本（血清/尿液/发酵液）血清/血浆：直接测定；若浓度过高，用样本稀释液稀释10-20倍尿液：离心去除沉淀，取上清液测定；或用样本稀释液稀释10-20倍发酵液：过滤去除菌体，取滤液测定；或用样本稀释液稀释10-100倍

测定操作步骤

分光光度法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至640nm，蒸馏水调零标准曲线绘制：

取标准品用提取液稀释成0、20、40、60、80、100μmol/mL系列浓度

取1mL标准溶液于比色管中，加入1mL试剂二、1mL试剂三和1mL试剂四，混匀

室温放置10min，以蒸馏水为参比，测定640nm波长下的吸光度，绘制标准曲线

回归方程：y=0.053x-0.0163，R²=0.9953（x为标准品浓度μmol/mL）样品测定：

取1mL样品溶液，按标准曲线步骤操作，测定吸光度

根据标准曲线计算样品中GABA含量

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟加样：每孔加入样本或标准品50μL，37℃孵育30min洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤3次，每次浸泡3min酶标抗体：每孔加入酶标抗体50μL，37℃孵育30min洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤5次，每次浸泡3min显色：每孔加入底物液50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度

HPLC法操作样品前处理：称取0.5g组织，加入5mL 80%乙醇，匀浆，超声30min，10000g离心15min，取上清液，浓缩至1mL，用0.22μm滤膜过滤衍生化：取1mL滤液，加入1mL 0.1mol/L硼酸缓冲液（pH8.8）和1mL 1%丹磺酰氯丙酮溶液，60℃避光反应30min，加入1mL 0.1mol/L NH₄OH终止反应色谱条件：C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），柱温35℃，流动相为甲醇-0.05mol/L乙酸钠（70:30），流速1.0mL/min，检测波长338nm进样测定：取10μL衍生化后的样品进样，记录色谱图，根据保留时间和峰面积定量

结果计算方法

单位定义

μmol/g 鲜重：每克鲜重样本中GABA的含量

μmol/mg protein：每毫克蛋白样本中GABA的含量

ng/mL：每毫升样本中GABA的含量（ELISA法）

分光光度法计算公式

GABA含量(μmol/g鲜重)=(A测定−A空白)+0.01630.053×WGABA含量(μmol/g鲜重)=0.053×W(A测定−A空白)+0.0163

A测定：样本管吸光度值

A空白：空白管吸光度值

W：样本质量（g）

ELISA法计算公式

GABA含量(ng/mL)=样本OD值−空白OD值标准品OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数GABA含量(ng/mL)=标准品OD值−空白OD值样本OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数

HPLC法计算公式

GABA含量(μmol/g)=样品峰面积×标准品浓度×样品稀释倍数标准品峰面积×样品质量(g)GABA含量(μmol/g)=标准品峰面积×样品质量(g)样品峰面积×标准品浓度×样品稀释倍数

性能指标

指标 分光光度法 ELISA法 HPLC法

线性范围 0~100μmol/mL 0~1.6ng/mL 0~1000μmol/L

最低检测限 ≤0.5μmol/mL ≤0.01ng/mL ≤0.01μmol/L

回收率 90%~110% 90%~110% 95%~105%

批内精密度 CV≤5.0% CV≤3.0% CV≤2.0%

批间精密度 CV≤8.0% CV≤5.0% CV≤3.0%

稳定性 2-8℃保存12个月 2-8℃保存12个月 2-8℃保存12个月

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免GABA降解；-20℃可保存3个月

组织样本需洗净表面杂质，避免污染

液体样本需避免溶血和细菌污染

试剂使用：

苯酚和次氯酸钠需临用前配制，避免氧化失效

ELISA法试剂需避免反复冻融，用后立即放回2-8℃保存

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

分光光度法反应需在碱性条件下进行，确保反应完全

ELISA法需严格控制孵育时间和温度，避免影响显色反应

HPLC法需严格控制衍生化反应条件和色谱参数，确保分离效果

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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