谷丙转氨酶/丙氨酸氨基转氨酶（GPT/ALT)测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

谷丙转氨酶（GPT/ALT）是参与人体蛋白质新陈代谢的重要酶类，其测定具有重要的临床和科研价值：临床诊断：诊断和监测肝脏疾病，如肝炎、肝硬化、肝癌等疾病监测：评估心肌梗死、胰腺炎、胆囊炎等疾病的损伤程度药物监测：监测药物对肝脏的毒性作用科研应用：研究肝脏疾病的发病机制和药物疗效

测定原理

赖氏比色法

ALT催化丙氨酸和α-酮戊二酸转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙，在碱性条件下显棕红色，在505nm波长下测定吸光度，其吸光度与ALT活性成正比。反应式如下： 丙氨酸+α-酮戊二酸→ALT丙酮酸+谷氨酸丙氨酸+α-酮戊二酸ALT丙酮酸+谷氨酸 丙酮酸+2,4-二硝基苯肼→碱性条件丙酮酸-2,4-二硝基苯腙(棕红色)丙酮酸+2,4-二硝基苯肼碱性条件丙酮酸-2,4-二硝基苯腙(棕红色)

IFCC推荐方法（紫外比色法）

ALT催化L-丙氨酸与α-酮戊二酸的转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸在乳酸脱氢酶（LDH）催化下，与NADH反应生成L-乳酸和NAD+，通过监测340nm波长下NADH吸光度下降速率计算ALT活性。反应式如下： L-丙氨酸+α-酮戊二酸→ALT丙酮酸+L-谷氨酸L-丙氨酸+α-酮戊二酸ALT丙酮酸+L-谷氨酸 丙酮酸+NADH+H+→LDHL-乳酸+NAD+丙酮酸+NADH+H+LDHL-乳酸+NAD+

ELISA法

采用双抗体夹心原理，以特异性抗ALT抗体作为捕获抗体，酶标记抗ALT抗体作为检测抗体，通过底物显色反应测定ALT活性。

试剂盒组成

赖氏法试剂盒

组分 规格 作用说明

试剂一 液体100mL×1瓶 含0.1mol/L丙氨酸-0.02mol/L α-酮戊二酸缓冲液（pH7.4）

试剂二 液体50mL×1瓶 含2,4-二硝基苯肼溶液

试剂三 液体50mL×1瓶 含0.4mol/L NaOH溶液

标准品 液体1mL×1支 含200U/L ALT标准品

IFCC推荐方法试剂盒

组分 规格 作用说明

试剂一 液体100mL×1瓶 含L-丙氨酸、α-酮戊二酸、NADH、LDH、缓冲液（pH7.5）

试剂二 液体50mL×1瓶 含启动试剂

标准品 液体1mL×1支 含200U/L ALT标准品

ELISA法试剂盒

组分 规格 作用说明

包被板 96孔×1块 预包被抗ALT抗体

酶标抗体 液体6mL×1瓶 含HRP标记抗ALT抗体

标准品 液体1mL×2瓶 含0U/L、20U/L、50U/L、100U/L、200U/L、400U/L ALT标准品

样本稀释液 液体20mL×1瓶 含PBS缓冲液（pH7.4）

洗涤液 液体20mL×1瓶 含0.05% Tween-20的PBS缓冲液

底物液 液体6mL×1瓶 含TMB底物液

终止液 液体6mL×1瓶 含2mol/L H₂SO₄溶液

自备仪器与试剂

必备仪器

赖氏法：可见分光光度计（505nm检测通道）、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅

IFCC推荐方法：紫外分光光度计（340nm检测通道）、1cm石英比色皿、半自动生化分析仪

ELISA法：酶标仪（450nm检测通道）、96孔板、洗板机

通用：电子天平、离心机、可调式移液器、漩涡混匀器

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、比色管、试管架

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水

样本前处理方法

血清/血浆样本采集：空腹采集静脉血，分离血清/血浆保存：4℃可保存3天，-20℃可保存1个月溶血处理：若样本溶血，需重新采集样本，避免红细胞中ALT干扰测定

组织/细胞样本组织处理：称取0.1g组织，加入1mL生理盐水，冰浴匀浆细胞处理：收集1×10⁶细胞，加入1mL生理盐水，冰浴超声波破碎离心：10000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测

尿液/脑脊液样本采集：收集晨尿或随机尿，脑脊液样本需无菌采集稀释：用生理盐水稀释10-20倍后测定保存：4℃可保存24h，-20℃可保存1个月

测定操作步骤

赖氏法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零样本测定：

取比色管，加入0.1mL样本 + 0.5mL试剂一，37℃水浴30min

加入0.5mL试剂二，混匀，37℃水浴20min

加入5.0mL试剂三，混匀，室温放置10min

测定505nm波长下的吸光度空白对照：取0.1mL生理盐水替代样本，同样处理标准曲线绘制：将标准品稀释成0、20、40、80、120、200U/L系列浓度，同样处理

IFCC推荐方法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零样本测定：

在石英比色皿中加入2.0mL试剂一 + 0.1mL样本，37℃预温5min

加入0.5mL试剂二，立即混匀，记录340nm处30s、1min、2min、3min的吸光度

计算吸光度下降速率（ΔA/min）空白对照：取0.1mL生理盐水替代样本，同样处理标准曲线绘制：将标准品稀释成0、20、40、80、120、200U/L系列浓度，同样处理

ELISA法操作包被板准备：从试剂盒中取出包被板，平衡至室温样本与标准品加样：分别加入50μL样本和标准品至对应孔中，37℃孵育30min洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤3次，每次浸泡3min酶标抗体加样：加入50μL酶标抗体至每孔，37℃孵育30min洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤5次，每次浸泡3min底物显色：加入50μL底物液至每孔，37℃避光孵育15min终止反应：加入50μL终止液至每孔，立即读取450nm波长下的吸光度

结果计算方法

单位定义

U/L：每升样本中每分钟催化生成1μmol丙酮酸的酶量

U/g 鲜重：每克鲜重样本每分钟催化生成1μmol丙酮酸的酶量

赖氏法计算公式

ALT活性(U/L)=(A测定−A空白)×C标(A标准−A空白)ALT活性(U/L)=(A标准−A空白)(A测定−A空白)×C标

A测定：样本管吸光度值

A空白：空白管吸光度值

A标准：标准管吸光度值

C标：标准品浓度（U/L）

IFCC推荐方法计算公式

ALT活性(U/L)=ΔA/min×V总×106ε×d×V样ALT活性(U/L)=ε×d×V样ΔA/min×V总×106

ΔA/min：340nm处吸光度下降速率

V总：反应体系总体积（mL）

ε：NADH摩尔消光系数（6.22×10³ L/mol/cm）

d：比色皿光径（cm）

V样：样本体积（mL）

ELISA法计算公式

ALT活性(U/L)=(A测定−A空白)×C标(A标准−A空白)ALT活性(U/L)=(A标准−A空白)(A测定−A空白)×C标

A测定：样本孔吸光度值

A空白：空白孔吸光度值

A标准：标准孔吸光度值

C标：标准品浓度（U/L）

性能指标

指标 赖氏法 IFCC推荐方法 ELISA法

线性范围 0~200U/L 0~1000U/L 0~400U/L

最低检测限 ≤5U/L ≤5U/L ≤2U/L

回收率 90%~110% 95%~105% 90%~110%

批内精密度 CV≤8.0% CV≤5.0% CV≤5.0%

批间精密度 CV≤10.0% CV≤8.0% CV≤8.0%

稳定性 2-8℃保存12个月 2-8℃保存12个月 2-8℃保存12个月

注意事项

样本处理：

样本需避免溶血和脂血，避免红细胞中ALT干扰测定

组织样本需新鲜制备，避免ALT失活

尿液样本需离心去除沉淀后测定

试剂使用：

赖氏法试剂需现配现用，避免2,4-二硝基苯肼分解失效

IFCC推荐方法试剂需避免反复冻融，用后立即放回2-8℃保存

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

赖氏法反应温度需严格控制在37℃，反应时间30分钟

IFCC推荐方法需严格控制预温时间和读数时间

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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