亮氨酸氨基肽酶（LAP）测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

亮氨酸氨基肽酶（LAP）广泛存在于肝、肾、胰等组织中，尤其以肝脏中含量最为丰富，其测定具有重要的临床和科研价值：临床诊断：肝病患者因肝细胞损伤，血清LAP的活性均有不同程度的升高，可作为肝病的辅助诊断指标疾病监测：诊断和监测肝硬化、病毒性肝炎、肝癌、胆道阻塞等疾病农业研究：土壤LAP活性可作为土壤肥力和微生物活性的指标生物学研究：了解蛋白质代谢和酶学机制

测定原理

分光光度法

LAP分解L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在405nm有吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算LAP活性。反应式如下： L-亮氨酰对硝基苯胺+H2O→LAP亮氨酸+对硝基苯胺L-亮氨酰对硝基苯胺+H2OLAP亮氨酸+对硝基苯胺

速率法

LAP催化L-亮氨酸-4-硝基苯胺水解产生对硝基苯胺，后者在405nm波长下有最大吸收峰，通过测定体系吸光度的增加值，即可计算LAP的酶活。

试剂盒组成

分光光度法试剂盒

组分 规格 作用说明

提取液 液体50mL×1瓶 含Tris-HCl缓冲液（pH7.4），用于提取样本中的LAP

试剂A 液体20mL×1瓶 含L-亮氨酰对硝基苯胺，LAP反应底物

试剂B 粉剂×1瓶 含稳定剂，需临用前加入2mL蒸馏水溶解

标准品 液体1mL×1支 含100U/L LAP标准品，用于建立标准曲线

ELISA法试剂盒

组分 规格 作用说明

包被板 96孔×1板 包被有抗LAP单克隆抗体

酶标抗体 液体10mL×1瓶 含HRP标记的抗LAP多克隆抗体

标准品 液体1mL×1支 含100ng/mL LAP标准品，用于建立标准曲线

底物液 液体5mL×2瓶 含TMB底物，显色反应试剂

终止液 液体5mL×1瓶 含2M硫酸，终止显色反应

自备仪器与试剂

必备仪器

分光光度法：可见分光光度计（405nm检测通道）、1mL石英比色皿

ELISA法：酶标仪（450nm检测通道）、96孔板

通用：低温离心机（≥10000g）、恒温水浴锅、可调式移液器

现场检测：快速检测盒、一次性采样管、便携式比色计

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、三氯乙酸

样本前处理方法

血清/血浆样本采集：空腹采集静脉血，分离血清/血浆保存：4℃可保存3天，-20℃可保存1个月去蛋白：若样本浑浊，加入等体积去蛋白剂，混匀后10000g离心10min，取上清液

尿液样本采集：收集晨尿或随机尿稀释：用蒸馏水稀释10-20倍后测定保存：4℃可保存24h，-20℃可保存1个月

组织/细胞样本组织处理：称取0.1g组织，加入1mL提取液，冰浴匀浆细胞处理：收集1×10⁶细胞，加入1mL提取液，冰浴超声波破碎离心：10000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测

土壤/水体样本土壤样本：称取1g土壤，加入5mL提取液，振荡提取30min，过滤后测定水体样本：清洁水样直接测定；浑浊水样过滤后测定

测定操作步骤

分光光度法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至405nm，蒸馏水调零试剂配制：将试剂B加入2mL蒸馏水溶解，再加入试剂A中混匀样本测定：

在石英比色皿中加入250μL样本和750μL工作液，混匀后立即记录405nm处初始吸光值A₁和2min后的吸光值A₂，计算ΔA=A₂-A₁

空白对照：以蒸馏水代替样本，同样处理标准曲线绘制：将标准品稀释成0、20、40、60、80、100U/L系列浓度，同样处理

标准曲线回归方程：y=0.005x+0.0073，R²=0.9997

ELISA法操作试剂配制：将标准品稀释成0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6ng/mL系列浓度加样：每孔加入标准品或样本100μL，37℃孵育1h洗板：用洗涤液洗板3次，每次浸泡3min酶标抗体：每孔加入酶标抗体100μL，37℃孵育1h显色：每孔加入底物液100μL，室温避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，在450nm波长下测定吸光度

结果计算方法

单位定义

U/L：每升血清每分钟催化生成1μmol对硝基苯胺的酶量

ng/mL：每毫升样本中LAP的浓度

U/mgprot：每毫克组织蛋白每分钟催化生成1μmol对硝基苯胺的酶量

分光光度法计算公式

LAP活性(U/L)=ΔA×V总×106ε×d×t×V样LAP活性(U/L)=ε×d×t×V样ΔA×V总×106

ΔA：405nm处吸光度变化值

V总：反应体系总体积（L）

ε：对硝基苯胺摩尔消光系数（9.4×10³ L/mol/cm）

d：比色皿光径（cm）

t：反应时间（min）

V样：样本体积（L）

简化计算

当反应体系为1000μL，反应时间2min时： LAP活性(U/L)=ΔA×0.001×1069.4×103×1×2×0.00025=53.2×ΔA1LAP活性(U/L)=9.4×103×1×2×0.00025ΔA×0.001×106=153.2×ΔA

性能指标

指标 要求

线性范围 0~200U/L（速率法）；0~100U/L（酶法）；0~1.6ng/mL（ELISA法）

最低检测限 ≤0.1U/L（速率法）；≤0.01ng/mL（ELISA法）

回收率 90%~110%

批内精密度 CV≤3.0%

批间精密度 CV≤5.0%

稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%

注意事项

样本处理：

样本需避免溶血和脂血，避免干扰测定结果

尿液样本需新鲜采集，避免LAP失活

组织样本需-20℃保存，避免酶活性失活

试剂使用：

酶试剂需避免反复冻融，用后立即放回-20℃保存

显色剂需临用前配制，避光保存

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

酶法测定需控制温度在37℃，避免影响酶活性

比色法需严格控制加热时间，避免显色过度

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

公司正在出售的产品