尿素氮测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

尿素氮（BUN）是蛋白质代谢的终产物，其测定具有重要的临床和科研价值：临床诊断：评估肾功能，判断肾小球滤过功能疾病监测：诊断和监测肾炎、肾衰竭、尿毒症等疾病营养评估：评价机体蛋白质营养状况环境监测：检测水体和土壤中的尿素含量，评估环境污染程度农业应用：测定土壤和肥料中的尿素含量，指导合理施肥

测定原理

尿素酶-谷氨酸脱氢酶法

尿素+2H2O→尿素酶2NH4++CO2尿素+2H2O尿素酶2NH4++CO2 NH4++α-酮戊二酸+NADH→谷氨酸脱氢酶谷氨酸+NAD++H2ONH4++α-酮戊二酸+NADH谷氨酸脱氢酶谷氨酸+NAD++H2O 通过监测340nm波长下NADH吸光度下降速率计算尿素氮含量。

二乙酰一肟比色法

尿素+二乙酰一肟→酸性条件红色缩合物尿素+二乙酰一肟酸性条件红色缩合物 在540nm波长下测定吸光度，其吸光度与尿素氮含量成正比。

速率法

尿素酶催化尿素水解产生氨，氨与酚和次氯酸钠反应生成蓝色化合物，通过监测600nm波长下吸光度上升速率计算尿素氮含量。

试剂盒组成

尿素酶-谷氨酸脱氢酶法试剂盒

组分 规格 作用说明

试剂一 液体100mL×1瓶 含Tris-HCl缓冲液（pH8.0）、α-酮戊二酸、NADH，-20℃保存

试剂二 液体50mL×1瓶 含尿素酶、谷氨酸脱氢酶，-20℃保存

试剂三 液体10mL×1瓶 含尿素标准品（10mmol/L），用于建立标准曲线

提取液 液体100mL×1瓶 含Tris-HCl缓冲液（pH7.4），用于样本提取

去蛋白剂 液体50mL×1瓶 含三氯乙酸溶液，用于去除样本中的蛋白质

二乙酰一肟比色法试剂盒

组分 规格 作用说明

试剂A 液体50mL×1瓶 含二乙酰一肟、FeCl₃，显色剂

试剂B 液体50mL×1瓶 含浓硫酸、H₃PO₄，酸性催化剂

标准品 液体10mL×1瓶 含尿素标准品（100mg/dL），用于建立标准曲线

自备仪器与试剂

必备仪器

分光光度法：紫外分光光度计（340nm/540nm检测通道）、1mL石英比色皿

速率法：半自动/自动生化分析仪

ELISA法：酶标仪（450nm检测通道）、96孔板

通用：低温离心机（≥10000g）、恒温水浴锅、可调式移液器

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、三氯乙酸

样本前处理方法

血清/血浆样本采集：空腹采集静脉血，分离血清/血浆保存：4℃可保存3天，-20℃可保存1个月去蛋白：若样本浑浊，加入等体积去蛋白剂，混匀后10000g离心10min，取上清液

尿液样本采集：收集晨尿或随机尿稀释：用蒸馏水稀释10-20倍后测定保存：4℃可保存24h，-20℃可保存1个月

组织/细胞样本组织处理：称取0.1g组织，加入1mL提取液，冰浴匀浆细胞处理：收集1×10⁶细胞，加入1mL提取液，冰浴超声波破碎离心：10000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测

土壤/水体样本土壤样本：称取1g土壤，加入5mL提取液，振荡提取30min，过滤后测定水体样本：清洁水样直接测定；浑浊水样过滤后测定

测定操作步骤

尿素酶-谷氨酸脱氢酶法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零试剂配制：按试剂一:试剂二=5:1的比例配制工作液样本测定：

在石英比色皿中加入20μL样本和280μL工作液，混匀

记录340nm处20s时的吸光值A₁和5min20s后的吸光值A₂，计算ΔA=A₁-A₂

空白对照：取20μL提取液替代样本，同样处理标准曲线绘制：将尿素标准品稀释成0、2、4、6、8、10mmol/L系列浓度，同样处理

二乙酰一肟比色法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零样本测定：

取比色管，加入0.1mL样本 + 0.5mL试剂A + 0.5mL试剂B，混匀

沸水浴加热10min，取出冷却至室温

以蒸馏水为参比，测定540nm波长下的吸光度标准曲线绘制：将尿素标准品稀释成0、20、40、60、80、100mg/dL系列浓度，同样处理

速率法操作仪器设置：将生化分析仪设置为速率法，波长600nm，温度37℃试剂配制：按试剂一:试剂二=5:1的比例配制工作液样本测定：加入样本和工作液，启动测定程序，监测吸光度上升速率

结果计算方法

单位定义

mmol/L：每升样本中尿素氮的毫摩尔数

mg/dL：每分升样本中尿素氮的毫克数（1mmol/L=2.8mg/dL）

mg/kg：每千克样本中尿素氮的毫克数

计算公式

尿素氮含量(mmol/L)=ΔA×V总×109ε×d×t×V样尿素氮含量(mmol/L)=ε×d×t×V样ΔA×V总×109

ΔA：340nm处吸光度变化值

V总：反应体系总体积（L）

ε：NADH摩尔消光系数（6.22×10³ L/mol/cm）

d：比色皿光径（cm）

t：反应时间（min）

V样：样本体积（L）

简化计算

当反应体系为300μL，反应时间5min时： 尿素氮含量(mmol/L)=ΔA×0.0003×1096.22×103×1×5×0.00002=482.3×ΔA1尿素氮含量(mmol/L)=6.22×103×1×5×0.00002ΔA×0.0003×109=1482.3×ΔA

性能指标

指标 要求

线性范围 0~20mmol/L（速率法）；0~10mmol/L（酶法）；0~100mg/dL（比色法）

最低检测限 ≤0.1mmol/L

回收率 90%~110%

批内精密度 CV≤3.0%

批间精密度 CV≤5.0%

稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%

注意事项

样本处理：

样本需避免溶血和脂血，避免干扰测定结果

尿液样本需新鲜采集，避免尿素分解

组织样本需-20℃保存，避免尿素酶活性失活

试剂使用：

酶试剂需避免反复冻融，用后立即放回-20℃保存

二乙酰一肟试剂需避光保存，避免分解

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

酶法测定需控制温度在37℃，避免影响酶活性

比色法需严格控制加热时间，避免显色过度

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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