植物硝态氮测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

硝态氮是植物吸收氮素的主要形式之一，其测定具有重要的生理和应用价值：植物营养学：评估植物氮素营养状况，指导合理施肥农业生产：优化氮肥管理，提高作物产量和品质生态研究：监测生态系统氮循环过程和氮素利用效率育种研究：筛选氮高效利用的作物品种环境科学：评估土壤和水体氮素污染程度

测定原理

紫外分光光度法

硝态氮在210nm波长处有特征吸收峰，通过测定吸光度计算硝态氮含量。加入NaOH或氨水可消除有机物干扰。 NO3−→210nm特征吸收峰NO3−210nm特征吸收峰

酚二磺酸比色法

硝态氮与酚二磺酸反应生成黄色硝基酚二磺酸化合物，在碱性条件下转化为稳定的橙黄色化合物，400nm波长下的吸光度与硝态氮含量成正比。 NO3−+酚二磺酸→加热黄色硝基酚二磺酸化合物NO3−+酚二磺酸加热黄色硝基酚二磺酸化合物 黄色硝基酚二磺酸化合物→碱性条件橙黄色化合物黄色硝基酚二磺酸化合物碱性条件橙黄色化合物

硝酸还原酶法

硝酸还原酶将NO₃⁻还原为NO₂⁻，通过测定NO₂⁻的生成速率计算硝态氮含量。加入NADH作为电子供体。 NO3−+NADH→硝酸还原酶NO2−+NAD+NO3−+NADH硝酸还原酶NO2−+NAD+

试剂盒组成

组分 规格 作用说明

试剂一 液体100mL×1瓶 含提取液，用于提取植物组织中的硝态氮，-20℃保存

试剂二 液体50mL×1瓶 含缓冲液，-20℃保存

试剂三 液体50mL×1瓶 含显色剂，-20℃保存

试剂四 液体50mL×1瓶 含标准硝态氮溶液，用于建立标准曲线，-20℃保存

试剂五 粉剂×1瓶 含酚二磺酸，需临用前加入10mL蒸馏水溶解，避光保存

试剂六 液体50mL×1瓶 含NaOH溶液，用于碱性条件反应，室温保存

试剂七 液体50mL×1瓶 含EDTA溶液，用于消除金属离子干扰，室温保存

自备仪器与试剂

必备仪器

紫外分光光度计/酶标仪（210nm/400nm检测通道）

低温离心机（≥10000g）

恒温水浴锅/金属浴（控温精度±0.5℃）

可调式移液器（10-1000μL）

组织匀浆器/研钵

马弗炉（用于土壤样本灰化）

必备耗材

离心管（1.5mL、10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、活性炭

样本前处理方法

植物组织样本组织处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液，冰浴匀浆破碎处理：8000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测样本稀释：若硝态氮浓度过高，用提取液稀释1-10倍后测定去色处理：若样本颜色较深，加入0.1g活性炭，振荡5min后过滤

土壤样本取土样：取5-10g新鲜土样，过2mm筛，去除石块和植物残体风干：自然风干后，磨碎过0.25mm筛提取：准确称取1g土样，加入5mL提取液，振荡提取30min过滤：用定量滤纸过滤，滤液即为硝态氮提取液，立即测定或-20℃保存

营养液样本取样：吸取5.0mL营养液，置于50mL容量瓶中稀释：加蒸馏水至刻度，摇匀后取滤液备用去色：若营养液有颜色，加入0.5-1.0g活性炭，振荡过滤

测定操作步骤

紫外分光光度法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至210nm，蒸馏水调零样本测定：

在石英比色皿中加入1.0mL样本，测定吸光度A₂₁₀

加入0.1mL NaOH溶液，测定吸光度A₂₁₀'

计算ΔA = A₂₁₀ - A₂₁₀'标准曲线：将标准品稀释成0、2、4、6、8、10μg/mL系列浓度，同样处理

酚二磺酸比色法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零样本处理：取5.0mL样本，置于蒸发皿中，在70℃水浴蒸干反应：加入0.5mL酚二磺酸，充分研磨，静置10min显色：加入10mL蒸馏水，滴加NaOH溶液至呈碱性，转移至50mL容量瓶，定容测定：在400nm波长下测定吸光度标准曲线：将标准品蒸干后同样处理，绘制标准曲线

硝酸还原酶法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零样本测定：

取比色管，加入0.5mL样本 + 0.2mL NADH + 0.2mL硝酸还原酶，37℃水浴30min

加入0.1mL显色剂，室温放置15min，测定吸光度标准曲线：将标准品稀释成0、0.5、1、2、4、8μmol/L系列浓度，同样处理

结果计算方法

单位定义

mg/kg 鲜重：每克鲜重样本中硝态氮的毫克数

mg/L：每升营养液或土壤提取液中硝态氮的毫克数

μg/g 干重：每克干重样本中硝态氮的微克数

紫外分光光度法计算公式

硝态氮含量(mg/kg)=C×V×Dm×1000硝态氮含量(mg/kg)=m×1000C×V×D

C：由标准曲线查得的硝态氮浓度（μg/mL）

V：样本提取液总体积（mL）

D：稀释倍数

m：样本质量（g）

酚二磺酸比色法计算公式

硝态氮含量(mg/kg)=[(A测定−A空白)/(A标准−A空白)]×C标×V总m硝态氮含量(mg/kg)=m[(A测定−A空白)/(A标准−A空白)]×C标×V总

A测定：样本管吸光度值

A空白：空白管吸光度值

A标准：标准管吸光度值

C标：标准品浓度（μg/mL）

V总：样本提取液总体积（mL）

m：样本质量（g）

硝酸还原酶法计算公式

硝态氮含量(μmol/g)=(A测定−A空白)×C标×V总(A标准−A空白)×m×V样硝态氮含量(μmol/g)=(A标准−A空白)×m×V样(A测定−A空白)×C标×V总

A测定：样本管吸光度值

A空白：空白管吸光度值

A标准：标准管吸光度值

C标：标准品浓度（μmol/mL）

V总：样本提取液总体积（mL）

m：样本质量（g）

V样：测定时所用样本体积（mL）

性能指标

指标 要求

线性范围 紫外法：0~10μg/mL；酚二磺酸法：0~5μg/mL；硝酸还原酶法：0~8μmol/L

最低检测限 紫外法：≤0.1μg/mL；酚二磺酸法：≤0.05μg/mL；硝酸还原酶法：≤0.01μmol/L

回收率 90%~110%

批内精密度 CV≤5.0%

批间精密度 CV≤8.0%

稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免硝态氮转化为其他形态；-20℃可保存3个月

组织样本需洗净土壤并擦干后称重，避免土壤干扰

土壤样本需自然风干后磨碎，避免高温和强酸强碱处理

试剂使用：

酚二磺酸需现配现用，避免失效

NADH对光敏感，需避光保存，避免反复冻融

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

紫外法测定时需使用石英比色皿，避免玻璃吸收紫外线

酚二磺酸法需严格控制蒸干温度，避免有机物碳化

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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