水土中亚硝酸盐含量测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

亚硝酸盐广泛存在于水体和土壤中，是有机氮分解的重要中间产物，也可能来自人为污染。其测定具有重要的环境和健康意义：环境监测：反映水体和土壤的氮素污染程度，评估水质和土壤质量食品安全：监测食品和饲料中的亚硝酸盐含量，预防中毒事件健康风险评估：亚硝酸盐可与胺类物质反应生成致癌的亚硝胺，危害人体健康水产养殖：监测养殖水体中的亚硝酸盐含量，防止鱼虾中毒死亡

测定原理

可见分光光度法

在酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物，再与N-1-萘基乙二胺形成紫红色偶氮化合物，在540nm处有特征吸收峰，其颜色深浅与亚硝酸盐含量成正比。反应式如下： NO2−+对氨基苯磺酸→酸性条件重氮化合物NO2−+对氨基苯磺酸酸性条件重氮化合物 重氮化合物+N-1-萘基乙二胺→紫红色偶氮化合物重氮化合物+N-1-萘基乙二胺→紫红色偶氮化合物

ELISA法

应用双抗体夹心法测定标本中亚硝酸盐水平。用纯化的亚硝酸盐抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入亚硝酸盐，再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的亚硝酸盐呈正相关。

试剂盒组成

可见分光光度法试剂盒

组分 规格 作用说明

试剂一 液体50mL×1瓶 含磷酸缓冲液，提供酸性反应环境

试剂二 液体25mL×1瓶 含对氨基苯磺酸溶液，重氮化反应试剂

试剂三 液体25mL×1瓶 含N-1-萘基乙二胺溶液，偶联反应试剂

试剂四 粉剂×1瓶 含亚硝酸钠标准品，用于建立标准曲线

提取液 液体100mL×1瓶 含提取液，用于土壤和组织样本的提取

ELISA法试剂盒

组分 规格 作用说明

酶标包被板 96T×1盒 已包被亚硝酸盐单克隆抗体，用于捕获样本中的亚硝酸盐

标准品 液体1mL×1瓶 含亚硝酸盐标准品（220ng/L），用于建立标准曲线

酶标试剂 液体6mL×1瓶 含HRP标记的亚硝酸盐抗体，用于检测结合的亚硝酸盐

显色剂A 液体6mL×1瓶 含底物过氧化氢溶液，用于显色反应

显色剂B 液体6mL×1瓶 含TMB底物，用于显色反应

终止液 液体6mL×1瓶 含硫酸溶液，终止显色反应

浓缩洗涤液 20mL×1瓶 含0.05%吐温20的PBS溶液，用于洗涤

自备仪器与试剂

必备仪器

分光光度法：可见分光光度计（540nm检测通道）、1mL玻璃比色皿、恒温培养箱

ELISA法：酶标仪（450nm检测通道）、96孔板、恒温培养箱

通用：电子天平、离心机、可调式移液器、漩涡振荡器、研钵/组织匀浆器

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、比色管、试管架

自备试剂：蒸馏水/去离子水、浓盐酸、氢氧化钠

样本前处理方法

土壤样本采样：取5-10g新鲜土样，过2mm筛，去除石块和植物残体提取：准确称取1g土样，加入5mL提取液，振荡提取30min过滤：用定量滤纸过滤，滤液即为待测液保存：立即测定或-20℃保存

水样清洁水样：直接测定浑浊水样：用滤纸或0.45μm滤膜过滤后测定高浓度水样：用蒸馏水稀释后测定含悬浮物水样：离心后取上清液测定

组织样本动物组织：准确称取0.1g组织，加入1mL提取液，冰浴匀浆植物组织：称取0.1g组织，加入1mL提取液，冰浴研磨离心处理：10000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测样本稀释：若亚硝酸盐含量过高，用提取液稀释后测定

测定操作步骤

可见分光光度法操作

标准曲线绘制：

将标准品用蒸馏水稀释成0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6μmol/L系列浓度

取各浓度标准液0.5mL，加入试剂一0.5mL、试剂二0.5mL、试剂三0.5mL，混匀

室温避光反应15min，用1cm比色皿在540nm波长下测定吸光度

以亚硝酸盐浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线

样本测定：

取样品0.5mL，加入试剂一0.5mL、试剂二0.5mL、试剂三0.5mL，混匀

室温避光反应15min，用1cm比色皿在540nm波长下测定吸光度

空白对照：以蒸馏水代替样品，同样处理

ELISA法操作试剂平衡：试剂盒从冰箱取出，室温平衡15-30min标准品稀释：将标准品稀释成6ng/L-220ng/L系列浓度加样：取96孔板，加入标准品/样本50μL + HRP标记检测抗体100μL，37℃温育30min洗涤：弃去液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次，拍干显色：每孔加入显色剂A、B各50μL，37℃避光孵育10min终止：每孔加入终止液50μL，终止反应（蓝色立转黄色）测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）

结果计算方法

分光光度法计算

亚硝酸盐含量计算： 亚硝酸盐含量(mg/kg)=C×V×nW亚硝酸盐含量(mg/kg)=WC×V×n

C：从标准曲线上查得的亚硝酸盐浓度（μmol/L）

V：提取液总体积（L）

n：稀释倍数

W：样本质量（kg）

换算关系：

1μmol/L亚硝酸盐 = 0.046mg/L（以NO₂⁻计）

1μmol/L亚硝酸盐 = 0.069mg/L（以NaNO₂计）

ELISA法计算标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线样本亚硝酸盐浓度计算：根据样本OD值，在标准曲线上查得亚硝酸盐浓度，再乘以稀释倍数

性能指标

指标 要求

线性范围 分光光度法：0~1.6μmol/L；ELISA法：6ng/L~220ng/L

最低检测限 分光光度法：≤0.01μmol/L；ELISA法：≤3ng/L

回收率 90%~110%

批内精密度 CV≤5.0%

批间精密度 CV≤8.0%

稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免亚硝酸盐被氧化或还原

土壤样本需自然风干后磨碎，避免高温和强酸强碱处理

水样需避免阳光直射，尽快测定

试剂使用：

显色剂需临用前配制，避光保存

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

标准品需-20℃冷冻保存，避免反复冻融

测定过程：

反应温度需严格控制在25℃，反应时间15分钟

测定需在避光条件下进行，避免亚硝酸盐分解

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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