谷氨酰胺酶（GLS)测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

谷氨酰胺酶（GLS）广泛存在于高等动物、细菌和植物根中，其测定具有重要的生理和临床意义：生理研究：在氮代谢中具有重要调控作用，调节游离氨含量和尿素代谢临床诊断：作为肝病、肾损伤等疾病的生物标志物肿瘤研究：参与肿瘤细胞能量代谢，是肿瘤治疗的潜在靶点食品科学：评估食品中谷氨酰胺的含量和营养价值环境保护：监测土壤和水体中氮素的转化和循环

测定原理

GLS催化谷氨酰胺水解生成L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性；或通过偶联谷氨酸脱氢酶反应，测定NADH的消耗速率，反映谷氨酰胺酶活性。 谷氨酰胺+H2O→GLS谷氨酸+NH3谷氨酰胺+H2OGLS谷氨酸+NH3

试剂盒组成

组分 规格 作用说明

试剂A 液体50mL×1瓶 含0.1mol/L pH8.0 Tris-HCl缓冲液，提供酶促反应环境

试剂B 粉剂×1瓶 含谷氨酰胺底物，需临用前加入10mL蒸馏水溶解

试剂C 液体10mL×1瓶 含奈氏试剂，显色反应试剂

试剂D 液体10mL×1瓶 含标准氨溶液，用于建立标准曲线

试剂E 液体10mL×1瓶 含终止液，终止酶促反应

自备仪器与试剂

必备仪器

分光光度法：可见分光光度计（420nm检测通道）、1mL玻璃比色皿

微量法：酶标仪（420nm检测通道）、96孔板

通用：低温离心机（≥8000g）、恒温水浴锅、可调式移液器、研钵/组织匀浆器

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、手术剪/镊子

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水

样本前处理方法

动植物组织样本新鲜组织：准确称取0.1g植物组织，加入1mL提取液，冰浴匀浆细胞样本：收集500万细胞，加入1mL提取液，冰浴超声波破碎离心处理：12000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测样本稀释：若酶活性过高，用提取液稀释1-10倍后测定

土壤样本取土样：取5-10g新鲜土样，过2mm筛，去除石块和植物残体提取：加入5mL提取液，振荡30min，3000g离心10min过滤：取上清液用0.45μm滤膜过滤，滤液即为酶提取液保存：立即测定或-20℃保存3个月

测定操作步骤

分光光度法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零酶促反应：

取比色管，加入样本0.5mL + 试剂B 0.2mL，混匀

37℃水浴反应30min，加入试剂E 0.2mL终止反应

空白对照：取样本0.5mL + 提取液0.2mL，同样处理显色反应：

向各管加入试剂C 0.5mL，混匀，室温放置10min

在420nm波长下测定各管吸光度

以空白管调零，读取样本管吸光度值

微量法操作工作液配制：取试剂A 9mL + 试剂B 0.5mL + 试剂C 0.5mL，混匀样本测定：

取96孔板，加入样本20μL + 工作液180μL，混匀

37℃恒温孵育30min，酶标仪420nm波长下测定吸光度

空白对照：取提取液20μL + 工作液180μL，同样处理结果计算：ΔA = A样本 - A空白

结果计算方法

单位定义

U/g 鲜重：每克组织每分钟催化产生1μmol氨的酶量

U/L：每毫升样本每分钟催化产生1μmol氨的酶量

U/mg 蛋白：每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol氨的酶量

计算公式

GLS酶活性(U/g鲜重)=(A样−A空)×C标×V总(A标−A空标)×t×WGLS酶活性(U/g鲜重)=(A标−A空标)×t×W(A样−A空)×C标×V总

A样-A空：样本扣除空白后的吸光度值

C标：标准品浓度（μmol/mL）

V总：样本提取液总体积（mL）

A标-A空标：标准品扣除空白后的吸光度值

t：反应时间（min）

W：样本质量（g）

简化公式

按鲜重计算：GLS酶活性 = (A样-A空)/(A标-A空标) × C标 × V总/(t × W)

按蛋白计算：GLS酶活性 = (A样-A空)/(A标-A空标) × C标 × V总/(t × mgprot)

性能指标

指标 要求

线性范围 0~20μmol/L氨，线性相关系数r≥0.995

最低检测限 ≤0.01U/g鲜重

回收率 90%~110%

批内精密度 CV≤5.0%

批间精密度 CV≤8.0%

稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免酶活性失活；-20℃可保存3个月

酶提取液需用pH8.0 Tris-HCl缓冲液，避免过酸或过碱影响酶活性

样本处理过程中需避免高温和光照，防止酶活性降低

试剂使用：

奈氏试剂需现配现用，避免分解

谷氨酰胺底物需临用前配制，避免失活

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

反应温度需严格控制在37℃，反应时间30min

显色反应后需立即测定，2小时后吸光度值会下降

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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