葡萄糖含量测试盒 新品

葡萄糖含量测试盒

测定意义与原理

测定意义

葡萄糖是生物体内最重要的能量来源和代谢中间产物，其含量检测在临床医学、生物学研究、食品工业、农业研究等领域具有重要意义：临床医学：诊断糖尿病、低血糖症等代谢疾病，监测血糖水平生物学研究：了解细胞能量代谢途径和信号传导机制食品工业：评估食品营养价值、控制食品加工过程和质量农业研究：研究植物生长发育、抗逆性机制和肥料效应

测定原理

葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)：葡萄糖氧化酶(GOD)催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化物酶(POD)催化过氧化氢与4-氨基安替比林和酚反应生成红色醌类化合物，在505nm处有特征吸收峰，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比。反应式如下： 葡萄糖+O2+H2O→GOD葡萄糖酸+H2O2葡萄糖+O2+H2OGOD葡萄糖酸+H2O2 2H2O2+4-氨基安替比林+酚→POD红色醌类化合物+4H2O2H2O2+4-氨基安替比林+酚POD红色醌类化合物+4H2O

己糖激酶法(HK法)：己糖激酶(HK)催化葡萄糖与ATP反应生成6-磷酸葡萄糖和ADP，6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)催化6-磷酸葡萄糖与NADP+反应生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，在340nm处有特征吸收峰，其吸光度变化与葡萄糖含量成正比。反应式如下： 葡萄糖+ATP→HK6-磷酸葡萄糖+ADP葡萄糖+ATPHK6-磷酸葡萄糖+ADP 6-磷酸葡萄糖+NADP+→G6PDH6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+6-磷酸葡萄糖+NADP+G6PDH6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+

邻甲苯胺法(OT法)：葡萄糖与邻甲苯胺在酸性条件下加热反应生成蓝色Schiff碱，在630nm处有特征吸收峰，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比。

苯酚法：葡萄糖与苯酚在浓硫酸作用下反应生成橙黄色化合物，在490nm处有特征吸收峰，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比。

试剂盒组成

葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)试剂盒

组分 规格 作用说明

试剂一 液体100mL×1瓶 含缓冲液、苯酚和4-氨基安替比林溶液

试剂二 液体10mL×1瓶 含葡萄糖氧化酶和过氧化物酶溶液

标准品 液体1mL×1支 含5.55mmol/L葡萄糖标准液

己糖激酶法(HK法)试剂盒

组分 规格 作用说明

试剂一 液体100mL×1瓶 含缓冲液、ATP、NADP+和己糖激酶溶液

试剂二 液体10mL×1瓶 含6-磷酸葡萄糖脱氢酶溶液

标准品 液体1mL×1支 含5.55mmol/L葡萄糖标准液

邻甲苯胺法(OT法)试剂盒

组分 规格 作用说明

试剂一 液体100mL×1瓶 含邻甲苯胺和冰醋酸溶液

标准品 液体1mL×1支 含5.55mmol/L葡萄糖标准液

苯酚法试剂盒

组分 规格 作用说明

试剂一 液体100mL×1瓶 含苯酚溶液

试剂二 液体100mL×1瓶 含浓硫酸溶液

标准品 液体1mL×1支 含5.55mmol/L葡萄糖标准液

自备仪器与试剂

必备仪器

葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)/邻甲苯胺法(OT法)/苯酚法：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿/96孔板、研钵、电子天平

己糖激酶法(HK法)：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿/96孔板、研钵、电子天平

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器、超声破碎仪

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水

样本前处理方法

血清/血浆样本采集：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20°C，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻处理：直接检测。

植物组织样本取样：称取0.1g样本，加入1mL提取液，研磨成匀浆提取：80℃水浴30min，期间振荡2-3次离心：8000g 4℃离心10min，取上清，用提取液定容至10mL，待测

食品/饲料样本取样：称取0.1g样本，加入1mL提取液，研磨成匀浆提取：80℃水浴30min，期间振荡2-3次离心：8000g 4℃离心10min，取上清，用提取液定容至10mL，待测

细胞/微生物样本收集：先收集微生物或细胞到离心管内，离心后弃上清破碎：按照微生物或细胞数量（10⁴个）:提取液体积(mL)为500~1000:1的比例（建议500万微生物或细胞加入1mL提取液），超声波破碎微生物或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）离心：8000g 4℃离心10min，取上清，待测

测定操作步骤

葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)操作仪器预热：可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到505nm，蒸馏水调零试剂配制：

工作液：将试剂一和试剂二按10:1比例混合，临用前配制样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 20 20

工作液 1000 1000

混匀后37℃水浴10min，冷却后测定505nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制：将葡萄糖标准品稀释成0、1.39、2.78、4.17、5.56、6.94mmol/L系列浓度，同样处理，测定505nm处的吸光值，绘制标准曲线

己糖激酶法(HK法)操作仪器预热：紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零试剂配制：

工作液：将试剂一和试剂二按10:1比例混合，临用前配制样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 10 10

工作液 1000 1000

混匀后立即记录340nm处初始吸光值A1和30min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1标准曲线绘制：将葡萄糖标准品稀释成0、1.39、2.78、4.17、5.56、6.94mmol/L系列浓度，同样处理，测定30min内吸光度变化，绘制标准曲线

邻甲苯胺法(OT法)操作仪器预热：可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到630nm，蒸馏水调零样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 20 20

试剂一 1000 1000

混匀后沸水浴10min，冷却后测定630nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制：将葡萄糖标准品稀释成0、1.39、2.78、4.17、5.56、6.94mmol/L系列浓度，同样处理，测定630nm处的吸光值，绘制标准曲线

苯酚法操作仪器预热：可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到490nm，蒸馏水调零样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 20 20

试剂一 200 200

试剂二 1000 1000

混匀后室温放置10min，测定490nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制：将葡萄糖标准品稀释成0、1.39、2.78、4.17、5.56、6.94mmol/L系列浓度，同样处理，测定490nm处的吸光值，绘制标准曲线

结果计算方法

单位定义

mmol/L：每升样本中葡萄糖的含量（mmol）

mg/dL：每分升样本中葡萄糖的含量（mg）

mg/g：每克样本中葡萄糖的含量（mg）

mg/mL：每毫升样本中葡萄糖的含量（mg）

葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)计算公式

葡萄糖含量(mmol/L)=(A测定−A空白)(A标准−A空白)×标准品浓度×稀释倍数葡萄糖含量(mmol/L)=(A标准−A空白)(A测定−A空白)×标准品浓度×稀释倍数 葡萄糖含量(mg/dL)=葡萄糖含量(mmol/L)×18葡萄糖含量(mg/dL)=葡萄糖含量(mmol/L)×18 葡萄糖含量(mg/g)=葡萄糖含量(mmol/L)×18×稀释倍数×V总W×1000葡萄糖含量(mg/g)=葡萄糖含量(mmol/L)×18×稀释倍数×WV总×1000

A测定：样本管吸光度值

A空白：空白管吸光度值

A标准：标准管吸光度值

标准品浓度：通常为5.55mmol/L

V总：样本提取液总体积（L）

W：样本质量（g）

18：葡萄糖摩尔质量（g/mol）换算为mg/dL的系数

己糖激酶法(HK法)计算公式

葡萄糖含量(mmol/L)=ΔAε×d×T×稀释倍数×1000葡萄糖含量(mmol/L)=ε×d×TΔA×稀释倍数×1000

ΔA：样本管吸光度变化值

ε：NADPH摩尔消光系数（6.22×10³ L/mol/cm）

d：比色皿光径（cm）

T：反应时间（min）

邻甲苯胺法(OT法)/苯酚法计算公式

葡萄糖含量(mmol/L)=(A测定−A空白)(A标准−A空白)×标准品浓度×稀释倍数葡萄糖含量(mmol/L)=(A标准−A空白)(A测定−A空白)×标准品浓度×稀释倍数

性能指标

指标 葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法) 己糖激酶法(HK法) 邻甲苯胺法(OT法) 苯酚法

线性范围 0~33.3mmol/L 0~33.3mmol/L 0~33.3mmol/L 0~33.3mmol/L

最低检测限 ≤0.1mmol/L ≤0.05mmol/L ≤0.1mmol/L ≤0.1mmol/L

回收率 95%~105% 95%~105% 90%~110% 90%~110%

批内精密度 CV≤2.0% CV≤1.5% CV≤2.5% CV≤2.5%

批间精密度 CV≤3.0% CV≤2.0% CV≤3.5% CV≤3.5%

稳定性 2-8℃保存6-12个月 2-8℃保存6-12个月 2-8℃保存6-12个月 2-8℃保存6-12个月

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免葡萄糖降解；-20℃可保存3个月

组织样本需冰浴匀浆，避免酶失活

超声波破碎时需控制功率和时间，避免样本降解

试剂使用：

工作液需临用前配制，避免氧化失效

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

标准品需4℃保存，避免反复冻融

邻甲苯胺法(OT法)试剂含有毒物质，需小心操作

测定过程：

反应温度和时间需严格控制，避免影响结果准确性

沸水浴时间需严格控制，避免颜色过深或过浅

显色后需立即测定，避免颜色褪去

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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