单宁酶（TAN）测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

单宁酶（Tannase，EC 3.1.1.20）是一种水解酶，其测定具有重要的实际意义：食品工业：用于果酒、果汁加工，降低单宁含量，改善口感茶叶加工：提高茶叶品质，减少苦涩味，提高水溶性物质浸出率饲料工业：降低饲料中单宁含量，提高饲料营养价值环境保护：处理含单宁的工业废水，降低COD和BOD生物制药：用于生产没食子酸等医药中间体

测定原理

采用没食子酸标准曲线法，单宁酶催化单宁酸水解生成没食子酸和葡萄糖，在碱性条件下，没食子酸与福林-酚试剂反应产生蓝色化合物，在760nm处有最大吸收峰，吸光度与没食子酸含量成正比，间接反映单宁酶的活性。 单宁酸+H2O→单宁酶没食子酸+葡萄糖单宁酸+H2O单宁酶没食子酸+葡萄糖

试剂盒组成

组分 规格 作用说明

试剂A 液体30mL×1瓶 含0.1mol/L pH5.0醋酸盐缓冲液，提供酶促反应环境

试剂B 液体10mL×1瓶 含1%单宁酸溶液，酶促反应底物

试剂C 液体10mL×1瓶 含10%钨酸钠溶液，终止反应

试剂D 液体10mL×1瓶 含20%碳酸钠溶液，显色反应缓冲液

试剂E 液体5mL×1瓶 含福林-酚试剂，显色反应试剂

标准品 液体1mL×1支 含10mmol/L没食子酸标准品，用于建立标准曲线

自备仪器与试剂

必备仪器

分光光度法：可见分光光度计（760nm检测通道）、1mL玻璃比色皿

微量法：酶标仪（760nm检测通道）、96孔板

通用：低温离心机（≥8000g）、恒温水浴锅、可调式移液器、漩涡混匀器

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、酶提取液（0.1mol/L pH5.0醋酸盐缓冲液）

样本前处理方法

微生物发酵液样本取发酵液8000g 4℃离心10min，取上清液作为粗酶液直接测定若酶活性过高，用试剂A稀释1-10倍后测定样本可-20℃保存3个月，避免反复冻融

动植物组织样本取新鲜组织约0.1g，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分加入1mL酶提取液，冰浴匀浆8000g 4℃离心10min，取上清液作为粗酶液直接测定

食品样本茶叶：取干燥茶叶0.05g，加入1mL酶提取液，40℃水浴浸提30min果汁/果酒：取样本1mL，加入1mL酶提取液，振荡混匀8000g 4℃离心10min，取上清液作为粗酶液直接测定

化妆品/饲料样本取样本0.1g，加入1mL酶提取液，振荡混匀37℃水浴提取30min，期间振荡2-3次8000g 4℃离心10min，取上清液作为粗酶液直接测定

测定操作步骤

标准曲线建立将10mmol/L没食子酸标准品用蒸馏水稀释成0、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mmol/L系列浓度取比色管，加入标准品溶液0.5mL + 试剂C 0.2mL + 试剂D 2.0mL + 试剂E 0.5mL，混匀37℃水浴反应30min，760nm波长下测定吸光度以没食子酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线

样本测定

酶促反应：

取比色管，加入样本0.5mL + 试剂B 0.5mL，混匀

37℃水浴反应30min，加入试剂C 0.2mL终止反应

空白管：加入样本0.5mL + 试剂C 0.2mL + 试剂B 0.5mL，同样处理

显色反应：

向反应管和空白管中加入试剂D 2.0mL + 试剂E 0.5mL，混匀

37℃水浴反应30min，760nm波长下测定吸光度

微量法操作取96孔板，加入样本25μL + 试剂B 25μL，混匀37℃恒温孵育30min，加入试剂C 10μL终止反应加入试剂D 100μL + 试剂E 25μL，混匀，37℃孵育30min酶标仪760nm波长下测定吸光度

结果计算方法

单位定义

U/mL：每毫升样本中，每分钟催化生成1μmol没食子酸的酶量

U/g：每克样本中，每分钟催化生成1μmol没食子酸的酶量

kat：每秒催化转化1摩尔底物的酶量（1kat=60×10⁶U）

计算公式

单宁酶活性(U/mL)=(A样−A空)×C标×V总(A标−A空标)×t×V样单宁酶活性(U/mL)=(A标−A空标)×t×V样(A样−A空)×C标×V总

A样-A空：样本扣除空白后的吸光度值

C标：标准品浓度（μmol/mL）

V总：酶促反应总体积（mL）

A标-A空标：标准品扣除空白后的吸光度值

t：反应时间（min）

V样：样本加入体积（mL）

简化公式

按体积计算：单宁酶活性（U/mL）= C标 × (A样-A空)/(A标-A空标) × V总/(t × V样)

按质量计算：单宁酶活性（U/g）= C标 × (A样-A空)/(A标-A空标) × V总/(t × W)

性能指标

指标 要求

线性范围 0~10mmol/L没食子酸当量，线性相关系数r≥0.995

最低检测限 ≤0.05U/mL

回收率 90%~110%

批内精密度 CV≤5.0%

批间精密度 CV≤8.0%

稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免酶活性失活；-20℃可保存3个月

酶提取液需用pH5.0醋酸盐缓冲液，避免过酸或过碱影响酶活性

样本中不能添加重金属离子，以免抑制酶活性

试剂使用：

单宁酸溶液需现配现用，避免分解

福林-酚试剂需避光保存，避免氧化

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

反应温度需严格控制在37℃，反应时间30min

终止反应后需立即加入显色试剂，避免酶促反应继续进行

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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