植物花色苷测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

花色苷（Anthocyanin）是植物重要的次生代谢产物，具有广泛的生物学功能和应用价值：植物生理功能：参与植物生长发育，调节激素平衡，增强植物抗逆性抗氧化作用：清除体内自由基，预防氧化损伤，延缓衰老抗炎抗菌：抑制炎症反应，增强免疫功能，预防感染食品着色剂：天然安全的食品着色剂，可替代合成色素医疗保健：具有降血脂、降血糖、抗肿瘤等多种保健功能

测定原理

采用pH示差法测定花色苷含量：

当pH为1.0时，花色苷在530nm处有最大吸收峰

当pH为4.5时，花色苷转变为无色查尔酮形式，在530nm处无吸收峰

利用此特性分别测定在不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值

计算ΔA = (A530 - A700)pH1.0 - (A530 - A700)pH4.5，ΔA与花色苷浓度成正比

试剂盒组成

组分 规格 作用说明

试剂A 液体20mL×1瓶 含pH1.0氯化钾-盐酸缓冲液，维持酸性反应环境

试剂B 液体20mL×1瓶 含pH4.5乙酸钠-乙酸缓冲液，促进花色苷向查尔酮形式转变

标准品 粉剂×1支 含10mg矢车菊素-3-葡萄糖苷标准品，用于建立标准曲线

标准品稀释液 液体20mL×1瓶 含0.1%盐酸-甲醇溶液，用于稀释标准品

提取液 液体100mL×1瓶 含0.1%盐酸-甲醇溶液，用于植物样本提取

自备仪器与试剂

必备仪器

可见分光光度计/酶标仪（530nm、700nm检测通道）

台式高速离心机（≥10000g）

可调式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）

恒温水浴锅（控温精度±0.5℃）

研钵/组织匀浆器

必备耗材

1mL玻璃比色皿/96孔板

离心管（1.5mL、10mL）

一次性无菌吸头

容量瓶（100mL、200mL）

自备试剂

蒸馏水/去离子水

0.1%盐酸-甲醇溶液（作为提取液）

样本前处理方法

新鲜植物组织样本取新鲜植物组织，用蒸馏水冲洗干净，滤纸吸干水分称取约0.1g组织，加入1mL 0.1%盐酸-甲醇溶液，冰浴匀浆4℃避光浸提24h，期间振荡2-3次10000rpm 25℃离心10min，取上清液置冰上待测若花色苷含量过高，可用0.1%盐酸-甲醇溶液稀释1-5倍后测定

干燥植物样本将样本烘干至恒重，粉碎后过40目筛称取约0.05g粉末，加入2mL 0.1%盐酸-甲醇溶液4℃避光浸提24h，10000rpm 25℃离心10min取上清液置冰上待测，若花色苷含量过高，可用0.1%盐酸-甲醇溶液稀释1-5倍后测定

果实/蔬菜样本取新鲜果实/蔬菜，去皮去核，切成小块称取约0.5g样本，加入5mL 0.1%盐酸-甲醇溶液，冰浴匀浆4℃避光浸提12h，10000rpm 25℃离心10min取上清液置冰上待测，若花色苷含量过高，可用0.1%盐酸-甲醇溶液稀释1-5倍后测定

测定操作步骤

标准曲线建立标准品配制：将10mg矢车菊素-3-葡萄糖苷标准品加入1mL标准品稀释液，配制成10mg/mL标准液梯度稀释：将10mg/mL标准液用0.1%盐酸-甲醇溶液稀释成0、0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64mg/mL的标准系列pH1.0条件下测定：取比色管，加入标准品溶液0.5mL + 试剂A 4.5mL，涡旋混匀，室温静置15min，测定530nm和700nm吸光度pH4.5条件下测定：取比色管，加入标准品溶液0.5mL + 试剂B 4.5mL，涡旋混匀，室温静置15min，测定530nm和700nm吸光度计算ΔA：ΔA = (A530 - A700)pH1.0 - (A530 - A700)pH4.5绘制标准曲线：以花色苷浓度为横坐标，ΔA为纵坐标绘制标准曲线

样本测定pH1.0条件下测定：取比色管，加入样本提取液0.5mL + 试剂A 4.5mL，涡旋混匀，室温静置15min，测定530nm和700nm吸光度pH4.5条件下测定：取比色管，加入样本提取液0.5mL + 试剂B 4.5mL，涡旋混匀，室温静置15min，测定530nm和700nm吸光度空白对照：取0.5mL 0.1%盐酸-甲醇溶液，按上述步骤操作，作为空白管计算ΔA：ΔA样 = (A530 - A700)pH1.0样 - (A530 - A700)pH4.5样计算ΔA空白：ΔA空白 = (A530 - A700)pH1.0空白 - (A530 - A700)pH4.5空白

结果计算方法

单位定义

mg/g鲜重：每克植物组织鲜重中花色苷的含量

mg/g干重：每克植物组织干重中花色苷的含量

mg/L：每升样本中花色苷的含量

计算公式

花色苷含量(mg/g鲜重)=(ΔA样−ΔA空白)×C标×V总(ΔA标−ΔA空白标)×W花色苷含量(mg/g鲜重)=(ΔA标−ΔA空白标)×W(ΔA样−ΔA空白)×C标×V总

ΔA样-ΔA空白：样本扣除空白后的ΔA值

C标：标准品浓度（mg/mL）

V总：样本提取液总体积（mL）

ΔA标-ΔA空白标：标准品扣除空白后的ΔA值

W：样本质量（g）

简化公式

按鲜重计算：花色苷（mg/g鲜重）= (ΔA样-ΔA空白)÷(ΔA标-ΔA空白标)×C标×V总÷W

按干重计算：花色苷（mg/g干重）= (ΔA样-ΔA空白)÷(ΔA标-ΔA空白标)×C标×V总÷W干

性能指标

指标 要求

线性范围 0.01~0.64mg/mL，线性相关系数r≥0.995

最低检测限 ≤0.005mg/mL

回收率 90%~110%

批内精密度 CV≤5.0%

批间精密度 CV≤8.0%

稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免花色苷降解；-80℃可保存1个月

提取过程需避光，避免花色苷光解

若样本吸光度不在测量范围内，建议稀释或增加样本量进行检测

试剂使用：

标准品需现配现用，2-8℃可保存四周

缓冲液对温度敏感，配制后需室温平衡30min

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

显色完成后需立即测定，2小时后吸光度值会下降

反应时间需严格控制在15min，确保花色苷充分转变

每个样本需设置至少3个平行实验，结果取平均值

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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