总胆固醇（TC）含量测试盒 新品

总胆固醇（TC）含量测试盒

测定意义与原理

测定意义

总胆固醇（TC）是血液中所有脂蛋白所含胆固醇的总和，是临床生化检测的重要指标，其含量检测具有重要意义：临床诊断：诊断和监测高脂血症、冠心病、动脉粥样硬化等心血管疾病疾病监测：评估血脂代谢状态、治疗效果和心血管疾病风险生物学研究：了解血脂代谢、能量代谢和细胞信号传导机制药物研发：筛选降脂药物，用于治疗高脂血症、心血管疾病等食品分析：评估食品中胆固醇含量，指导合理膳食

测定原理

酶比色法：胆固醇酯酶水解胆固醇酯生成游离胆固醇，胆固醇氧化酶氧化游离胆固醇生成过氧化氢，过氧化氢与显色剂反应生成有色化合物，在特定波长处测定吸光值。反应式如下： 胆固醇酯→胆固醇酯酶游离胆固醇+脂肪酸胆固醇酯胆固醇酯酶游离胆固醇+脂肪酸 游离胆固醇+O2→胆固醇氧化酶胆甾-4-烯-3-酮+H2O2游离胆固醇+O2胆固醇氧化酶胆甾-4-烯-3-酮+H2O2 H2O2+显色剂→过氧化物酶有色化合物H2O2+显色剂过氧化物酶有色化合物

高效液相色谱法：利用色谱分离技术分离血液中的胆固醇组分，通过紫外检测器检测胆固醇含量

ELISA法/化学发光法：利用特异性抗体与胆固醇结合，通过酶标二抗或化学发光标记物检测结合的胆固醇，根据吸光度值或发光强度计算胆固醇含量

试剂盒组成

酶比色法试剂盒

组分 规格 作用说明

提取液 液体60mL×1瓶 用于提取样本中的胆固醇

试剂一 液体45mL×1瓶 含胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶和显色剂

试剂二 液体10mL×1瓶 含胆固醇标准品

标准品 1mL×1支 含胆固醇标准液，用于建立标准曲线

ELISA法试剂盒

组分 规格 作用说明

包被板 96孔×1块 预包被抗胆固醇单克隆抗体

酶标抗体 液体6mL×1瓶 含HRP标记抗胆固醇抗体

标准品 液体1mL×6管 含0.1-10mmol/L胆固醇标准品

样本稀释液 10mL×1瓶 用于稀释样本和标准品

显色剂A液 6mL×1瓶 含过氧化氢溶液

显色剂B液 6mL×1瓶 含TMB溶液

终止液 6mL×1瓶 含硫酸溶液

20倍浓缩洗涤液 20mL×1瓶 用于洗涤酶标板

自备仪器与试剂

必备仪器

酶比色法：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿/96孔板、电子天平

高效液相色谱法：高效液相色谱仪、紫外检测器、色谱柱、台式离心机、可调式移液器、电子天平

ELISA法：酶标仪（450nm检测通道）、96孔板、37℃恒温箱、洗板机、可调式移液器、台式离心机

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器、超声破碎仪

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水

样本前处理方法

血清/血浆样本采集：采集血液，静置1-2小时（血清）或使用抗凝剂（血浆）离心：3000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

动植物组织样本取样：按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

细胞/微生物样本收集：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清破碎：按照细菌或细胞数量（10⁴个）:提取液体积(mL)为500~1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

测定操作步骤

酶比色法操作仪器预热：分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到500nm，蒸馏水调零试剂配制：

试剂一：临用前恢复至室温样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 标准管 测定管

蒸馏水 20 -- --

标准品 -- 20 --

样本 -- -- 20

试剂一 200 200 200

混匀后37℃水浴10min，记录500nm处的吸光值A空白、A标准和A测定结果计算： TC含量(mmol/L)=A测定−A空白A标准−A空白×标准品浓度×稀释倍数TC含量(mmol/L)=A标准−A空白A测定−A空白×标准品浓度×稀释倍数

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度

结果计算方法

单位定义

mmol/L：每升样本中总胆固醇的含量

mmol/g 鲜重：每克组织中总胆固醇的含量

nmol/mg prot：每毫克组织蛋白中总胆固醇的含量

酶比色法计算公式

TC含量(mmol/L)=A测定−A空白A标准−A空白×标准品浓度×稀释倍数TC含量(mmol/L)=A标准−A空白A测定−A空白×标准品浓度×稀释倍数 TC含量(mmol/g 鲜重)=TC含量(mmol/L)×V总W×稀释倍数TC含量(mmol/g 鲜重)=TC含量(mmol/L)×WV总×稀释倍数

A测定：样本管吸光度值

A空白：空白管吸光度值

A标准：标准管吸光度值

标准品浓度：通常为5.17mmol/L

V总：提取液总体积（mL）

W：组织重量（g）

ELISA法计算公式

TC含量(mmol/L)=样本OD值−空白OD值标准品OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数TC含量(mmol/L)=标准品OD值−空白OD值样本OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数

性能指标

指标 酶比色法 ELISA法

线性范围 0~12mmol/L 0.1-10mmol/L

最低检测限 ≤0.1mmol/L ≤0.05mmol/L

回收率 90%~110% 90%~110%

批内精密度 CV≤2.0% CV≤5.0%

批间精密度 CV≤5.0% CV≤8.0%

稳定性 2-8℃保存6-12个月 2-8℃保存6-12个月

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免胆固醇被氧化；-20℃可保存3个月

组织样本需冰浴匀浆，避免酶失活

液体样本需避免溶血和细菌污染

血清样本需避免脂血影响，脂血严重时需稀释样本

试剂使用：

试剂需临用前配制，避免氧化失效

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

标准品需4℃保存，避免反复冻融

测定过程：

反应温度需严格控制在37℃

加入样品启动反应后需在规定时间内完成比色测定

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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