甘油三酯（TG）含量测试盒

甘油三酯（TG）含量测试盒

测定意义与原理

测定意义

甘油三酯（TG）是由甘油和三个脂肪酸组成的酯，是人体内含量最多的脂类，其含量检测具有重要意义：临床诊断：诊断和监测高血脂症、动脉粥样硬化、冠心病、糖尿病、肥胖症等疾病疾病监测：评估脂肪代谢状态、心血管疾病风险和治疗效果生物学研究：了解脂肪代谢、能量代谢和细胞信号传导机制食品安全：评估食品营养价值、品质和贮藏条件农业应用：研究植物抗逆性机制、果实成熟过程等

测定原理

酶法/比色法/分光光度法：甘油三酯在脂肪酶的作用下水解生成甘油和脂肪酸，甘油经甘油激酶和磷酸甘油氧化酶作用生成过氧化氢，过氧化氢与4-氨基安替比林和酚类化合物反应生成红色醌类化合物，在550nm处有最大吸收峰，吸光度值与甘油三酯含量成正比。反应式如下： 甘油三酯+3H2O→脂肪酶甘油+3脂肪酸甘油三酯+3H2O脂肪酶甘油+3脂肪酸 甘油+ATP→甘油激酶3-磷酸甘油+ADP甘油+ATP甘油激酶3-磷酸甘油+ADP 3-磷酸甘油+O2→磷酸甘油氧化酶磷酸二羟丙酮+H2O23-磷酸甘油+O2磷酸甘油氧化酶磷酸二羟丙酮+H2O2 H2O2+4氨基安替比林+酚→过氧化物酶红色醌类化合物+4H2OH2O2+4氨基安替比林+酚过氧化物酶红色醌类化合物+4H2O

ELISA法/化学发光法：利用特异性抗体与甘油三酯结合，通过酶标二抗或化学发光标记物检测结合的甘油三酯，根据吸光度值或发光强度计算甘油三酯含量

试剂盒组成

酶法/比色法/分光光度法试剂盒

组分 规格 作用说明

缓冲液 液体60mL×1瓶 用于提供适宜的反应pH环境

酶试剂 液体45mL×1瓶 含脂肪酶、甘油激酶、磷酸甘油氧化酶、过氧化物酶等

底物试剂 液体10mL×1瓶 含4-氨基安替比林、酚类化合物等

标准品 1mL×1支 含甘油三酯标准液，用于建立标准曲线

ELISA法试剂盒

组分 规格 作用说明

包被板 96孔×1块 预包被抗甘油三酯单克隆抗体

酶标抗体 液体6mL×1瓶 含HRP标记抗甘油三酯抗体

标准品 液体1mL×6管 含0.1-10mmol/L甘油三酯标准品

样本稀释液 10mL×1瓶 用于稀释样本和标准品

显色剂A液 6mL×1瓶 含过氧化氢溶液

显色剂B液 6mL×1瓶 含TMB溶液

终止液 6mL×1瓶 含硫酸溶液

20倍浓缩洗涤液 20mL×1瓶 用于洗涤酶标板

自备仪器与试剂

必备仪器

酶法/比色法/分光光度法：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿/96孔板、研钵、电子天平

ELISA法：酶标仪（450nm检测通道）、96孔板、37℃恒温箱、洗板机、可调式移液器、台式离心机

化学发光法：半自动或全自动微孔板式化学发光检测仪、96孔板、37℃恒温箱、洗板机、可调式移液器、台式离心机

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器、超声破碎仪

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水

样本前处理方法

血清/血浆样本采集：采集血液，静置1-2小时（血清）或使用抗凝剂（血浆）离心：3000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

动植物组织样本取样：按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

细胞/微生物样本收集：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清破碎：按照细菌或细胞数量（10⁴个）:提取液体积(mL)为500~1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

食品/饲料样本提取：称取适量样本，加入提取液，振荡提取30min离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

测定操作步骤

酶法/比色法/分光光度法操作仪器预热：分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到550nm，蒸馏水调零试剂配制：

工作液：将酶试剂和底物试剂按比例混合备用样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 10 10

工作液 200 200

混匀后37℃水浴10min，记录550nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制：将甘油三酯标准品稀释成0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mmol/L系列浓度，同样处理，测定550nm处的吸光值，绘制标准曲线

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度

结果计算方法

单位定义

mmol/L：每升样本中甘油三酯的含量

μmol/g 鲜重：每克组织中甘油三酯的含量

μmol/mg prot：每毫克组织蛋白中甘油三酯的含量

酶法/比色法/分光光度法计算公式

甘油三酯含量(mmol/L)=(A测定−A空白)(A标准−A空白)×标准品浓度×稀释倍数甘油三酯含量(mmol/L)=(A标准−A空白)(A测定−A空白)×标准品浓度×稀释倍数 甘油三酯含量(μmol/g 鲜重)=(A测定−A空白)(A标准−A空白)×标准品浓度×V总V样×稀释倍数×1000甘油三酯含量(μmol/g 鲜重)=(A标准−A空白)(A测定−A空白)×标准品浓度×V样V总×稀释倍数×1000

A测定：样本管吸光度值

A空白：空白管吸光度值

A标准：标准管吸光度值

V总：反应体系总体积（mL）

V样：样本体积（mL）

ELISA法计算公式

甘油三酯含量(mmol/L)=样本OD值−空白OD值标准品OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数甘油三酯含量(mmol/L)=标准品OD值−空白OD值样本OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数

性能指标

指标 酶法/比色法/分光光度法 ELISA法/化学发光法

线性范围 0~5mmol/L 0.1-10mmol/L

最低检测限 ≤0.05mmol/L ≤0.05mmol/L

回收率 90%~110% 90%~110%

批内精密度 CV≤1.7% CV≤5.0%

批间精密度 CV≤5.0% CV≤8.0%

稳定性 2-8℃保存6-12个月 2-8℃保存6-12个月

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免甘油三酯被氧化；-20℃可保存3个月

组织样本需冰浴匀浆，避免酶失活

液体样本需避免溶血和细菌污染

食品/饲料样本需按比例提取，避免杂质干扰

试剂使用：

试剂需临用前配制，避免氧化失效

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

标准品需4℃保存，避免反复冻融

测定过程：

反应温度需严格控制在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）

加入样品启动反应后3秒内即刻比色测定

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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