脂肪酶（LPS)测试盒 新品

脂肪酶（LPS)测试盒

测定意义与原理

测定意义

脂肪酶（EC3.1.1.3）是一类催化脂肪水解的酶，广泛存在于动物、植物、微生物中，其活性检测具有重要意义：临床诊断：诊断和监测胰腺疾病、胃肠疾病、肝脏疾病等疾病监测：评估消化功能、组织损伤程度和治疗效果生物学研究：了解消化生理、脂肪代谢和能量代谢机制工业应用：评估食品、饲料、制药等行业的酶制剂活性药物研发：筛选脂肪酶抑制剂，用于治疗肥胖、高血脂等植物学研究：研究植物种子萌发、脂类代谢、抗逆性机制

测定原理

比色法/分光光度法：脂肪酶在中性条件下水解底物（如橄榄油）生成脂肪酸，脂肪酸与显色剂反应生成有色化合物，在特定波长处测定吸光值。反应式如下： 橄榄油→脂肪酶脂肪酸+甘油橄榄油脂肪酶脂肪酸+甘油 脂肪酸+显色剂→有色化合物脂肪酸+显色剂→有色化合物

荧光法：脂肪酶水解荧光标记的底物生成荧光产物，通过测定荧光强度变化反映脂肪酶活性

ELISA法：利用特异性抗体与脂肪酶结合，通过酶标二抗检测结合的脂肪酶，根据吸光度值计算脂肪酶含量

试剂盒组成

比色法/分光光度法试剂盒

组分 规格 作用说明

提取液 液体60mL×1瓶 用于提取样本中的脂肪酶

试剂一 液体45mL×1瓶 含反应缓冲液，用于提供适宜的反应pH环境

试剂二 粉剂×1瓶 含橄榄油乳剂，反应底物

试剂三 粉剂×1瓶 含显色剂，用于检测生成的脂肪酸

标准品 1mL×1支 含油酸标准液，用于建立标准曲线

荧光法试剂盒

组分 规格 作用说明

提取液 液体60mL×1瓶 用于提取样本中的脂肪酶

试剂一 液体45mL×1瓶 含反应缓冲液，用于提供适宜的反应pH环境

试剂二 液体10mL×1瓶 含荧光标记底物，反应底物

标准品 1mL×1支 含荧光标准液，用于建立标准曲线

ELISA法试剂盒

组分 规格 作用说明

包被板 96孔×1块 预包被抗脂肪酶单克隆抗体

酶标抗体 液体6mL×1瓶 含HRP标记抗脂肪酶抗体

标准品 液体1mL×6管 含0.1-10ng/mL脂肪酶标准品

样本稀释液 10mL×1瓶 用于稀释样本和标准品

显色剂A液 6mL×1瓶 含过氧化氢溶液

显色剂B液 6mL×1瓶 含TMB溶液

终止液 6mL×1瓶 含硫酸溶液

20倍浓缩洗涤液 20mL×1瓶 用于洗涤酶标板

自备仪器与试剂

必备仪器

比色法/分光光度法：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿/96孔板、研钵、电子天平

荧光法：荧光分光光度计/荧光酶标仪、台式离心机、恒温水浴锅、可调式移液器、96孔板、研钵、电子天平

ELISA法：酶标仪（450nm检测通道）、96孔板、37℃恒温箱、洗板机、可调式移液器、台式离心机

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器、超声破碎仪

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水

样本前处理方法

动植物组织样本取样：按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

细胞/微生物样本收集：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清破碎：按照细菌或细胞数量（10⁴个）:提取液体积(mL)为500~1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

血清/血浆样本

血清(浆)样品：直接检测

食品/饲料样本提取：称取适量样本，加入提取液，振荡提取30min离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

测定操作步骤

比色法/分光光度法操作仪器预热：分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到550nm，蒸馏水调零试剂配制：

试剂二：临用前加入10mL蒸馏水充分乳化备用

试剂三：临用前加入20mL蒸馏水充分溶解备用样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入试剂三100μL，摇匀，室温放置10min

记录550nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制：将油酸标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，同样处理，测定550nm处的吸光值，绘制标准曲线

荧光法操作仪器预热：荧光分光光度计/酶标仪预热30min以上，设置激发波长355nm，发射波长460nm试剂配制：

试剂二：临用前稀释至合适浓度备用样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴10min，立即测定荧光强度F空白和F测定标准曲线绘制：将荧光标准品稀释成0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5μmol/L系列浓度，同样处理，测定荧光强度，绘制标准曲线

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度

结果计算方法

单位定义

U/mg prot：每毫克组织蛋白每分钟生成1μmol脂肪酸的酶量

U/g 鲜重：每克组织每分钟生成1μmol脂肪酸的酶量

U/L：每升样本每分钟生成1μmol脂肪酸的酶量

U/g 干重：每克干物质每分钟生成1μmol脂肪酸的酶量

比色法/分光光度法计算公式

脂肪酶活性(U/mg prot)=(A测定−A空白)×V总Cpr×V样×T×K脂肪酶活性(U/mg prot)=Cpr×V样×T(A测定−A空白)×V总×K

A测定：样本管吸光度值

A空白：空白管吸光度值

V总：反应体系总体积（mL）

Cpr：样本蛋白浓度（mg/mL）

V样：样本体积（mL）

T：反应时间（min）

K：标准曲线斜率（μmol脂肪酸/吸光度单位）

荧光法计算公式

脂肪酶活性(U/mg prot)=(F测定−F空白)×V总Cpr×V样×T×K脂肪酶活性(U/mg prot)=Cpr×V样×T(F测定−F空白)×V总×K

F测定：样本管荧光强度

F空白：空白管荧光强度

V总：反应体系总体积（mL）

Cpr：样本蛋白浓度（mg/mL）

V样：样本体积（mL）

T：反应时间（min）

K：标准曲线斜率（μmol脂肪酸/荧光强度单位）

ELISA法计算公式

脂肪酶含量(ng/mL)=样本OD值−空白OD值标准品OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数脂肪酶含量(ng/mL)=标准品OD值−空白OD值样本OD值−空白OD值×标准品浓度×稀释倍数

性能指标

指标 比色法/分光光度法 荧光法 ELISA法

线性范围 0~10U/L 0~5U/L 0.1-10ng/mL

最低检测限 ≤0.1U/L ≤0.05U/L ≤0.05ng/mL

回收率 90%~110% 90%~110% 90%~110%

批内精密度 CV≤1.7% CV≤1.5% CV≤5.0%

批间精密度 CV≤5.0% CV≤4.0% CV≤8.0%

稳定性 2-8℃保存6-12个月 2-8℃保存6-12个月 2-8℃保存6-12个月

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免脂肪酶失活；-20℃可保存3个月

组织样本需冰浴匀浆，避免酶失活

液体样本需避免溶血和细菌污染

食品/饲料样本需按比例提取，避免杂质干扰

试剂使用：

试剂需临用前配制，避免氧化失效

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

标准品需4℃保存，避免反复冻融

荧光试剂需避光保存和使用

测定过程：

反应温度需严格控制在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）

加入样品启动反应后3秒内即刻比色测定

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

荧光测定时需避免背景荧光干扰

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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