总抗氧化能力（FRAP法）测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

总抗氧化能力（T-AOC）是评估生物体内所有抗氧化物质和抗氧化酶总和的重要指标，具有广泛的生物学和临床意义：氧化应激评估：直接反映机体氧化与抗氧化系统的平衡状态疾病诊断：与心血管疾病、糖尿病、癌症、神经退行性疾病等密切相关药物筛选：评估中草药、保健食品、化妆品等的抗氧化活性环境毒理：评估环境污染物对生物体氧化损伤的影响抗衰老研究：作为抗氧化能力和衰老程度的重要指标

测定原理

采用FRAP（Ferric Reducing Antioxidant Power）法，即铁离子还原法，在酸性条件下，三价铁离子（Fe³⁺-TPTZ）被样本中的抗氧化物质还原为二价铁离子（Fe²⁺-TPTZ），产生蓝绿色络合物，在593nm处有最大吸收峰，吸光度与总抗氧化能力成正比。反应式如下： Fe3+-TPTZ→抗氧化物质Fe2+-TPTZ(蓝绿色)Fe3+-TPTZ抗氧化物质Fe2+-TPTZ(蓝绿色)

试剂盒组成

组分 规格 作用说明

试剂A 液体30mL×1瓶 含醋酸盐缓冲液，pH3.6，提供酸性反应环境

试剂B 液体2mL×1瓶 含10mmol/L TPTZ溶液，与Fe³⁺形成有色络合物

试剂C 液体2mL×1瓶 含20mmol/L FeCl₃·6H₂O溶液，提供Fe³⁺离子

标准品 液体1mL×1支 含10mmol/L Trolox标准品（维生素E类似物），用于建立标准曲线

提取液 液体100mL×1瓶 含pH7.4磷酸盐缓冲液，用于动植物组织和细胞样本提取

自备仪器与试剂

必备仪器

分光光度法：可见分光光度计（593nm检测通道）、1mL玻璃比色皿

微量法：酶标仪（593nm检测通道）、96孔板

通用：低温离心机（≥10000g）、恒温水浴锅、可调式移液器、漩涡混匀器

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、抗凝剂（肝素/柠檬酸钠）

样本前处理方法

血清/血浆样本血清样本：血液凝固后3000g 4℃离心10min，取上清直接测定或-80℃保存（≤30天）血浆样本：用肝素/柠檬酸钠抗凝（不宜用EDTA），5000g 4℃离心10min，取上清待测样本需避免溶血，溶血会导致结果偏高

尿液/唾液样本取新鲜样本，3000g 4℃离心10min，取上清液直接测定若抗氧化能力过强，可用生理盐水稀释1-10倍后测定样本可-80℃保存1个月，解冻后离心取上清

细胞/组织样本细胞样本：收集500万对数生长期细胞，8000g 4℃离心5min弃上清，加入1mL提取液冰浴超声波破碎组织样本：按组织质量(g):提取液体积(mL)=1:5~10比例（建议0.1g组织加1mL提取液）冰浴匀浆10000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测

食品/化妆品样本液态样本：如饮料、化妆品溶液，可直接测定固态样本：磨碎后加入5-10倍体积的生理盐水，搅拌均匀后过滤，取上清测定提取物：将提取物配制成一定浓度（如5mg/mL）的溶液后测定

测定操作步骤

分光光度法操作

试剂准备：

将试剂盒所有组分平衡至室温（20-25℃）

工作液配制：取试剂A 25mL + 试剂B 1mL + 试剂C 1mL，充分混匀，即为FRAP工作液（现配现用）

Trolox标准品稀释：用生理盐水配制0、2、4、6、8、10mmol/L标准系列

标准曲线建立：

取比色管，加入标准品0.1mL + 工作液0.9mL，混匀后37℃反应10min

593nm波长下测定吸光度，以Trolox浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线

样本测定：

取比色管，加入样本0.1mL + 工作液0.9mL，混匀后37℃反应10min

593nm波长下测定吸光度（A样、A空）

微量法（酶标仪）操作

试剂准备：

FRAP工作液配制同分光光度法

用生理盐水将Trolox标准品稀释成0、2、4、6、8、10mmol/L标准系列

加样反应：

96孔板中每孔加入工作液200μL + 样本/标准品10μL，混匀

37℃孵育10min，593nm波长下测定吸光度

结果计算方法

单位定义

mmol Trolox当量/L：每升样本相当于Trolox的抗氧化能力

mmol Trolox当量/g鲜重：每克组织相当于Trolox的抗氧化能力

Trolox当量比：样本抗氧化能力与等浓度Trolox的比值

计算公式

总抗氧化能力(mmol TE/L)=(A样−A空)×C标×V总(A标−A空标)×V样总抗氧化能力(mmol TE/L)=(A标−A空标)×V样(A样−A空)×C标×V总

A样-A空：样本扣除空白后的吸光度值

C标：Trolox标准品浓度（mmol/L）

V总：反应体系总体积（1.0mL）

V样：样本加入体积（0.1mL）

简化公式

按体积计算：T-AOC（mmol TE/L）= C标 × (A样-A空)/(A标-A空标)

按鲜重计算：T-AOC（mmol TE/g鲜重）= C标 × (A样-A空)/(A标-A空标) × V总/W

性能指标

指标 要求

线性范围 0~10mmol Trolox当量/L，线性相关系数r≥0.995

最低检测限 ≤0.1mmol/L

回收率 90%~110%

批内精密度 CV≤5.0%

批间精密度 CV≤8.0%

稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免抗氧化物质失活；-80℃可保存1个月

血清样本避免溶血，溶血会导致结果偏高

样本中不能添加DTT、巯基乙醇等还原剂，也不宜添加Tween、Triton等去垢剂

试剂使用：

FRAP工作液需临用现配，24小时内用完

标准品需现配现用，避免氧化失效

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

反应温度需严格控制在37℃，反应时间10min

若吸光度下降超过50%，需稀释样本后重新测定

每个样本需设置至少3个平行实验，结果取平均值

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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