葡萄糖氧化酶（GOD）测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

葡萄糖氧化酶（GOD，EC1.1.3.4）是一种需氧脱氢酶，广泛存在于动植物和微生物中，具有重要的生理和应用价值：临床诊断：用于检测血糖水平，辅助诊断糖尿病及相关并发症食品工业：用于葡萄糖检测、食品保鲜、葡萄糖去除等生物传感器：构建葡萄糖生物传感器，实现血糖的实时监测抗氧化研究：GOD催化葡萄糖氧化产生的H₂O₂可用于抗氧化活性评价

测定原理（分光光度法）

采用双酶耦联法，GOD催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸和H₂O₂，过氧化物酶（POD）催化H₂O₂与4-氨基安替比林（4-AAP）和苯酚反应生成红色醌类化合物，在505nm处有最大吸收峰，吸光度与GOD活性成正比。反应式如下： 葡萄糖+O2+H2O→GOD葡萄糖酸+H2O2葡萄糖+O2+H2OGOD葡萄糖酸+H2O2 H2O2+4-AAP+苯酚→POD红色醌类化合物+H2OH2O2+4-AAP+苯酚POD红色醌类化合物+H2O

试剂盒组成

分光光度法试剂盒

组分 规格 作用说明

试剂一 液体25mL×1瓶 含0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.0，用于反应体系构建

试剂二 液体10mL×1瓶 含100mmol/L葡萄糖溶液，反应底物

试剂三 液体10mL×1瓶 含20U/mL过氧化物酶（POD），耦联酶

试剂四 液体10mL×1瓶 含20mmol/L 4-AAP + 100mmol/L苯酚溶液，显色剂

标准品 冻干品×1支 含100U GOD标准品，用于建立标准曲线

提取液 液体100mL×1瓶 含0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.4，用于样本提取

ELISA法试剂盒

组分 规格 作用说明

微孔酶标板 12孔×8条 预包被抗GOD抗体

标准品 冻干品×1支 GOD标准品，浓度梯度0、5、25、125、625、3125U/L

检测抗体-HRP 10mL×1瓶 辣根过氧化物酶标记的抗GOD抗体

样本稀释液 20mL×1瓶 用于样本稀释和标准品复溶

洗涤缓冲液 25mL×1瓶 20×浓缩液，用于洗涤酶标板

底物A/B液 6mL×2瓶 TMB显色液，用于HRP催化显色反应

终止液 6mL×1瓶 2M硫酸溶液，终止显色反应

自备仪器与试剂

必备仪器

分光光度法：可见分光光度计、恒温水浴锅、台式高速离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿

ELISA法：酶标仪（450nm/630nm）、洗板机、恒温培养箱、单道/多道移液器

通用：-20℃冰箱、电子天平、漩涡混匀器

必备耗材

分光光度法：离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器

ELISA法：一次性吸头、封板膜、96孔板架

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、抗凝剂（肝素/EDTA）

样本前处理方法

动植物组织样本取新鲜组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分按质量(g):提取液(mL)=1:5~10比例（建议0.1g组织加1mL提取液）冰浴匀浆8000g 4℃离心15min，取上清置冰上待测若GOD活性过高，可用提取液稀释1-5倍测定

细胞/细菌样本收集对数生长期细胞/细菌，8000g 4℃离心5min弃上清按细胞数(10⁴):提取液(mL)=500~1000:1比例加入提取液，冰浴超声破碎8000g 4℃离心15min，取上清置冰上待测

液体样本（血清/血浆/尿液/唾液/食品样本等）血清样本：血液凝固后3000g 4℃离心10min，取上清直接测定血浆样本：加入肝素/EDTA抗凝后，3000g 4℃离心10min，取上清直接测定尿液/唾液：新鲜样本3000g 4℃离心10min，取上清直接测定或用生理盐水稀释食品样本：固体食品需研磨后用提取液提取，液体食品直接测定

测定操作步骤

分光光度法操作

试剂准备：

将试剂盒平衡至室温（20-25℃）

配制工作液：取试剂一5mL + 试剂三0.5mL + 试剂四0.5mL，充分混匀

标准品复溶：将GOD标准品加入1mL蒸馏水复溶，得到100U/mL标准液

标准曲线建立：

稀释标准品至0、1、5、10、20、50U/mL

取比色皿，加入100μL标准品 + 900μL工作液，混匀后加入100μL试剂二

37℃水浴15min，505nm波长下测定吸光度

绘制标准曲线：y=0.005x+0.001（y为吸光度，x为GOD浓度）

样本测定：

分光光度计预热30min，505nm波长，蒸馏水调零

测定管：取1mL比色皿，加入100μL样本 + 900μL工作液，混匀后加入100μL试剂二

空白管：取1mL比色皿，加入100μL提取液 + 900μL工作液，混匀后加入100μL试剂二

37℃水浴15min，测定吸光度（A样、A空）

ELISA法操作

试剂准备：

将试剂盒平衡至室温（20-25℃）

配制洗涤液：20×浓缩液加蒸馏水稀释至1×工作液

加样：

空白孔加100μL样本稀释液，标准品/样本孔加100μL标准品/样本

封板膜封板，37℃温育30min

孵育与显色：

弃孔内液体，洗涤3次，拍干后加入100μL检测抗体-HRP

37℃温育30min，洗涤5次，拍干后加入底物A、B液各50μL

避光37℃显色15min，加入50μL终止液终止反应

读数：

酶标仪450nm波长，以空白孔调零，测定各孔吸光度（OD值）

酶活力计算方法

单位定义

U/g鲜重：每克组织鲜重每分钟催化1μmol葡萄糖氧化的酶量

U/mL：每毫升样本每分钟催化1μmol葡萄糖氧化的酶量

U/mgprot：每毫克蛋白每分钟催化1μmol葡萄糖氧化的酶量

分光光度法计算公式

GOD活性(U/g鲜重)=(A样−A空)−0.0010.005×V总W×V样GOD活性(U/g鲜重)=0.005(A样−A空)−0.001×W×V样V总

A样-A空：样本扣除空白后的吸光度值

V总：反应体系总体积（1.1mL）

W：组织鲜重（g）

V样：样本加入体积（0.1mL）

简化公式

按鲜重计算：GOD（U/g鲜重）= 200×(A样-A空)÷W

按液体体积计算：GOD（U/mL）= 200×(A样-A空)

按蛋白含量计算：GOD（U/mgprot）= 200×(A样-A空)÷Cpr

ELISA法计算根据标准品OD值绘制标准曲线，拟合回归方程根据样本OD值，从标准曲线查得GOD浓度（U/L）若样本已稀释，需乘以稀释倍数得到实际浓度

性能指标

指标 分光光度法要求 ELISA法要求

线性范围 0~50U/mL，R²≥0.995 0~3125U/L，R²≥0.99

检测下限 ≤0.5U/mL ≤2U/L

批内精密度 CV≤5.0% CV≤8.0%

批间精密度 CV≤8.0% CV≤10.0%

回收率 90%~110% 95%~105%

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免GOD失活；-80℃可保存1个月

匀浆与超声破碎需在冰浴中进行，控制温度在0-4℃

样本需避免污染，防止杂酶干扰检测结果

试剂使用：

葡萄糖溶液需现配现用，避免微生物污染

ELISA试剂避免反复冻融，稀释后试剂需在1周内用完

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

反应温度需严格控制在37℃，温度影响酶活性

ELISA加样需准确，避免交叉污染；温育时间需严格控制

若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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