禽流感病毒H5/H9亚型（AIV-H5/H9）核酸检测试剂盒 (双重荧光PCR法) 新品

 产品介绍：

该试剂盒采用双重TaqMan探针技术，可同时特异性检测禽流感病毒H5和H9亚型的血凝素（HA）基因，具有高灵敏度（检测下限可达1×10³ copies/mL）、高特异性（≥99%）和快速检测（1.5-2小时）的特点，适用于禽类呼吸道疾病的病原学诊断、疫情监测及进出口检疫，但需注意其结果需结合临床症状综合判断且对样本质量要求高。

、核心作用与检测原理

该试剂盒主要用于同步检测禽类咽喉拭子、泄殖腔拭子、肺脏等样本中的禽流感病毒H5和H9亚型，其核心原理基于：

双重靶标设计：针对H5和H9亚型血凝素（HA）基因的特异性保守区域设计引物与探针，实现亚型特异性检测

荧光通道分配：H5亚型检测通道（如FAM通道）和H9亚型检测通道（如HEX通道）实现同步检测，部分试剂盒含内源性内标（如RNase P基因）监控样本质量

技术优势：单管双重检测避免交叉污染，可有效区分H5、H9与其他禽流感亚型，为禽流感精准诊断提供依据215

二、产品性能与规格参数

性能指标  参数说明

检测方法  双重TaqMan荧光定量RT-PCR

规格  50T/盒（常见规格）

保存条件  -20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（<5次）

有效期  12个月（签收时剩余有效期≥9个月）

适用仪器  ABI 7500、QuantStudio 5、Bio-Rad CFX96等主流荧光定量PCR仪

检测范围  2×10³～1×10⁸ copies/mL

最低检测限  ≤1×10³ copies/mL（部分产品可达100-500拷贝/mL）

重复性  批内、批间CT值变异系数（CV）<3%

特异性  ≥99%，不与H7、N9等其他亚型及类似病原体发生交叉反应

重复性  批内、批间CT值变异系数（CV）<3%

三、操作流程与结果判读

核心操作步骤

样本采集：禽类咽喉拭子、泄殖腔拭子或肺脏组织，置于病毒保存液中

核酸提取：使用RNA提取试剂盒取RNA

试剂配制：按说明书比例混合反应液、酶液和模板RNA。例如，可将19μL反应液与1μL酶液混合，为每管20μL体系。

扩增反应：

预变性：95℃ 2-5分钟

扩增：40-45个循环（95℃ 10-15秒 → 60℃ 30-45秒，荧光信号于60℃采集）

结果判读标准

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈明显指数增长

可疑：35＜Ct值≤40，建议重复检测确认

阴性：Ct值＞40，无明显扩增曲线

实验有效性：阴性对照无扩增或Ct值＞40，阳性对照Ct值≤32且呈"S"型曲线

四、应用场景与核心优势

主要应用场景

临床诊断：对禽类（鸡、鸭、鸽等）急性呼吸道疾病进行病原学确诊

疫情监测：养殖场、活禽市场H5/H9亚型筛查，掌握流行病学动态

进出口检疫：活禽及禽类产品病毒检测，保障国际贸易安全

混合感染鉴别：与H7等其他禽流感亚型进行同步检测，明确混合感染情况

核心优势

双重检测机制：单管反应同时检测H5和H9亚型，提高检测效率，避免单一靶标检测的假阴性

高灵敏度：可检测低至1×10³ copies/mL的病毒载量，显著优于传统病毒培养法（需10⁴-10⁵ CFU/mL）

特异性强：针对H5和H9的特异性保守区域设计引物，避免与其他亚型交叉反应

快速高效：1.5-2小时出结果，较传统病毒培养法（72小时）效率大幅提升

五、局限性与关键注意事项

无法区分活病毒：PCR检测不能区分活病毒与死病毒，阳性结果需结合临床症状和病毒分离结果综合判断

样本质量依赖：样本采集、运输和保存不当会导致RNA降解，影响检测结果，需使用病毒保存液并-80℃保存

基因变异影响：H5和H9病毒HA基因的变异可能导致引物结合位点改变，产生假阴性结果

窗口期限制：感染初期（前3-5天）病毒载量最高，采样时间影响检出率

仅限科研用途：根据产品说明，该试剂盒仅可用于科研实验，不能直接用于临床诊断

公司正在出售的产品：

应用场景与产品选择建议

科研领域：

常规PCR试剂盒。

临床诊断：

探针法qPCR试剂盒（如牛白血病病毒，灵敏度100拷贝/反应）。

现场检测：

恒温扩增试剂盒（如LAMP法，90分钟出结果）