猪源性成分/内参基因(Porcine/18S)/核酸检测试剂盒(双重荧光PCR法) 新品

 产品介绍：

猪源性成分/内参基因(Porcine/18S)核酸检测试剂盒(双重荧光PCR法)是一种基于双重实时荧光定量PCR（Duplex qPCR）技术的分子检测产品。该试剂盒专门用于食品、饲料及生物制品中猪源性成分的定性检测与溯源分析。

该产品通过在一个反应体系中同时扩增猪源性特异性基因和真核生物内参基因（18S rRNA），实现了对目标物种的精准识别与检测过程的有效监控。它广泛应用于肉类掺假鉴定（如清真食品合规性检测）、饲料原料溯源、动物源性产品真实性评价以及进出口贸易的食品安全检测。

检测原理：双重荧光定量PCR

该试剂盒采用TaqMan探针法，通过设计两对特异性引物和两个不同荧光标记的探针，实现双重检测：

靶标基因选择：

猪源性成分 (Porcine)：通常靶向猪的线粒体细胞色素b基因（CYTB）或β-actin基因。线粒体基因因其拷贝数多，具有极高的检测灵敏度，适合检测深加工产品。

内参基因 (18S)：靶向真核生物保守的18S rRNA基因。该基因存在于所有真核生物中，用于验证样本中是否含有可扩增的基因组DNA，监控DNA提取质量及PCR反应体系是否存在抑制物（防假阴性）。

双重检测机制：

FAM通道：检测猪源性成分。若样本中含有猪DNA，FAM荧光信号会随PCR扩增而指数级增强。

VIC/HEX通道：检测18S内参基因。该通道必须出现有效扩增（Ct值通常≤33-35），表明实验操作及样本质量合格。

结果判定逻辑：只有当内参基因（VIC/HEX）扩增成功，且猪源性基因（FAM）出现特异性扩增曲线时，结果才被视为有效阳性。

核心组分与性能参数

PCR反应预混液：包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺缓冲液、UNG酶（防污染）及两组特异性引物探针混合物。

阴阳性对照：

阴性对照：无DNA酶的水。

关键性能参数：

阳性对照：含有猪基因组DNA或质粒的标准品。

关键性能参数：

最低检测限 (LOD)：通常可达 1×10³ copies/mL，部分产品灵敏度更高。

检测范围：通常为 2×10³ ~ 1×10⁸ copies/mL。

灵敏度（掺假量）：可检出样品中 0.1% 甚至更低的猪源性成分掺假。

特异性：与其他常见动物（如牛、羊、鸡、犬等）的DNA无交叉反应。

规格：常见规格为 50T/盒。

应用场景与意义

食品真实性与掺假检测：用于检测肉制品（如香肠、肉松）、罐头、方便面调料包中是否含有未标注的猪肉成分，保护消费者权益（特别是穆斯林群体的宗教饮食禁忌）。

饲料安全检测：依据国家标准（如GB/T 21101-2025）检测饲料中是否违规添加了猪源性肉骨粉，防止动物疫病传播（如口蹄疫、非洲猪瘟病毒载体检测）。

药品与保健品溯源：检测明胶胶囊、生物制剂（如肝素钠）等是否来源于猪副产物。

进出口检验检疫：作为国际贸易中动物源性成分检测的依据，符合欧盟(EU)2017/625等法规要求。

优势与局限性

特性  描述

高灵敏度  可检测出极低含量的猪源性DNA，甚至在高度加工（高温、高压）后仍能检出。

双重保障  内参基因监控确保了结果的可靠性，有效避免了因DNA降解或PCR抑制导致的假阴性。

快速高效  相比传统的凝胶电泳法，闭管检测无需开盖，减少了污染风险，2小时内可出结果。

适用基质广  适用于生鲜肉、深加工肉制品、饲料、骨粉、油脂、明胶等多种复杂样本。

局限性  无法区分生肉与经过深度加工的水解蛋白；检测结果为DNA水平，不能反映蛋白质过敏原活性。

操作与解读注意事项

样本前处理：

肉类样品：需充分绞碎混匀，避免局部取样误差。

深加工样品：如油脂、明胶，需采用专门的DNA提取方法（如CTAB法或试剂盒法）以去除PCR抑制物。

DNA提取：DNA纯度要求A260/A280比值在 1.7~2.0 之间。若A260/A280<1.7，可能存在蛋白质污染；若>2.0，可能存在RNA污染。

防污染：PCR实验室必须严格分区，使用带滤芯的吸头，防止扩增产物气溶胶污染导致假阳性。

结果判读标准：

有效内参：VIC/HEX通道Ct值 ≤ 33-35（参照GB/T 21101-2025），表明样本DNA提取成功且无PCR抑制。

阳性：FAM通道Ct值 ≤ 35，且扩增曲线呈典型的“S”型指数增长。

阴性：FAM通道无Ct值或Ct值 > 35，且无特异性扩增曲线。

储存条件：试剂盒通常需在 -20℃ 避光保存，运输和使用过程中应避免反复冻融。

公司正在出售的产品：

应用场景与产品选择建议

科研领域：

常规PCR试剂盒。

临床诊断：

探针法qPCR试剂盒（如牛白血病病毒，灵敏度100拷贝/反应）。

现场检测：

恒温扩增试剂盒（如LAMP法，90分钟出结果）