非洲猪瘟病毒核酸检测试剂盒(荧光 PCR 法) 新品

产品介绍：

非洲猪瘟病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)是一种用于定性检测猪血液、组织或环境样本中是否含有非洲猪瘟病毒（ASFV）核酸的分子生物学产品。该方法基于实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）技术，通过扩增和检测病毒特异性的DNA序列，为非洲猪瘟的临床辅助诊断、流行病学调查及环境监测提供准确、灵敏的实验室依据。

非洲猪瘟是一种由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起的急性、热性、高度接触性传染病，对养猪业危害巨大。因此，快速、精准的核酸检测是防控该病的关键手段。

基本原理

该试剂盒的核心原理是实时荧光定量PCR（qPCR），具体流程如下：

DNA提取：从待测样品（如猪全血、血清、脾脏、淋巴结或环境拭子等）中提取总核酸（DNA）。

荧光PCR扩增：利用针对非洲猪瘟病毒（ASFV）高度保守区域（通常是P72基因或VP72基因）设计的特异性引物和荧光标记的探针（如TaqMan探针），对提取的DNA进行扩增。

内源参照/质控：为了确保检测结果的可靠性，试剂盒通常会设置双重质控系统。部分试剂盒包含猪内源基因（如β-actin或18S rRNA）的检测，用于确认样本采集和DNA提取是否成功；同时包含阴阳性对照，监控整个反应体系的有效性。

实时检测与判读：在扩增过程中，随着病毒DNA片段的指数级增加，荧光信号也随之增强。仪器实时监测荧光信号，根据设定的阈值（Ct值）判定结果。若FAM通道出现特异性扩增曲线且Ct值低于阈值，则判定为阳性。

检测靶标与特异性

靶标基因：非洲猪瘟病毒P72基因（或VP72基因）。

保守性：P72基因是ASFV的主要衣壳蛋白基因，具有高度保守性，覆盖所有基因型，适合作为检测的靶点。

特异性：该方法能特异性地检测ASFV DNA，与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等其他常见猪病病原体无交叉反应，确保检测结果的准确性。

内源参照：猪内源基因（如β-actin）。

通用性：该基因存在于所有猪的组织和细胞中，用于确认样本中是否含有可扩增的猪源DNA，防止因样本采集不当或DNA降解导致的假阴性。

标本类型与处理

临床样本：猪的全血（EDTA抗凝）、血清、脾脏、淋巴结、肾脏、扁桃体等组织。

标本类型：

临床样本：猪的全血（EDTA抗凝）、血清、脾脏、淋巴结、肾脏、扁桃体等组织。

环境样本：猪舍环境拭子（如料槽、地面）、污水、饲料等。

媒介样本：钝缘软蜱（非洲猪瘟的传播媒介）。

样本处理：

血液/血清：直接提取DNA或按说明书处理。

组织：需使用组织研磨仪或液氮研磨成匀浆，再提取DNA。

拭子/环境样本：通常需在缓冲液中震荡洗脱，取上清液提取DNA。

应用价值

非洲猪瘟病毒核酸检测在多个领域具有重要的应用价值：

临床辅助诊断：在猪群出现疑似临床症状（如高热、皮肤发绀、流产等）时，快速确诊是否感染非洲猪瘟病毒，为疫情处置提供依据。

养殖场自主监测：在猪群未出现临床症状时，定期对猪群和环境进行监测，做到“早发现、早处置”，防止疫情暴发。

环境与生物安全监测：对猪场的栏舍、运输车辆、办公区等环境进行采样检测，评估生物安全措施的有效性，并指导全面消杀工作。

流行病学调查：在疫情发生后，对周边区域进行排查，追溯传染源和传播途径。

�� 优势与局限性

优势

极高的灵敏度：检测下限可低至 10³ copies/mL，能有效检出样品中微量的病毒DNA，即使在感染初期病毒载量较低时也能检出。

高特异性：结果客观准确，能有效区分非洲猪瘟病毒与其他病原体。

快速高效：整个PCR过程（不含DNA提取）通常在1.5-2小时内完成，无需电泳，闭管检测，降低了污染风险。

双重质控：通过内源参照基因和阴阳性对照的设置，确保了结果的可靠性，避免了假阴性或假阳性结果的产生。

局限性

无法区分死/活病毒：检测出阳性仅表明样品中含有病毒DNA，但无法确定病毒是否具有感染性（活病毒）。

实验室要求高：需要具备PCR实验室资质和专业的技术人员，以严格防止扩增产物的交叉污染。

样本质量影响：如果样本在采集、运输或储存过程中处理不当（如反复冻融、高温放置），导致DNA降解，则可能无法检出。

核心优势与技术要点：

高特异性

引物设计基于目标基因保守区域，可区分高度同源序列（如病毒变异株）。

高灵敏度

检测限低至10拷贝/反应，适用于微量样本。

高效扩增

热启动酶（如HotStarTaq）减少非特异性扩增，30分钟内完成40个循环。

防污染设计

UNG酶系统降解残留产物，避免交叉污染。

稳定性提升

冻干预混技术实现常温运输，操作便捷。

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注意事项：

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。