人源内参基因（GAPDH）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

 产品介绍：

人源内参基因（GAPDH）核酸检测试剂盒(荧光PCR法)是一种基于实时荧光定量PCR技术的标准化对照工具，主要用于基因表达研究中作为内参基因，通过检测人源GAPDH基因的稳定表达水平，校正样本间RNA/DNA起始量、逆转录效率及PCR扩增效率的差异，从而实现对目标基因表达量的精确相对定量。

一、核心作用与检测原理

该试剂盒主要用于作为内参基因进行基因表达标准化，而非直接检测特定病原体或转基因成分。其核心原理基于GAPDH作为管家基因的特性：

管家基因特性：GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）基因在几乎所有人类组织和细胞中均稳定高表达，其表达水平不受多数实验处理影响，分子量146kDa，由4个30-40kDa亚基组成

检测原理：试剂盒采用TaqMan探针法或SYBR Green染料法，在PCR扩增过程中实时监测荧光信号。通过测定GAPDH基因的Ct值，用于后续的ΔΔCt法计算，从而对目标基因的表达水平进行标准化

多重检测优势：部分试剂盒（如TaqMan™ GAPDH检测试剂）使用JUN™染料标记的QSY™探针，可与FAM™或VIC™染料标记的其他基因检测试剂联合使用，实现多重PCR反应18

二、产品性能与规格参数

性能指标  参数说明

检测方法  实时荧光PCR法（TaqMan探针法或SYBR Green法）

检测范围  不同产品检测范围不同，例如部分ELISA试剂盒的检测范围为1.563~100 ng/mL，而具体的核酸检测试剂盒的检测范围需参考其产品说明书。

灵敏度  Ct值通常在15-25之间（具体取决于细胞类型和RNA质量）

规格  50T/盒或250次反应（不同品牌有差异）

保存条件  -20℃避光保存，避免反复冻融

有效期  12个月（不同品牌可能有差异）

适用仪器  ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche LightCycler 480等主流荧光定量PCR仪

核心操作步骤

三、操作流程与质量控制

核心操作步骤

样本准备：提取高质量总RNA（A260/A280比值1.8-2.0），避免DNA污染

试剂配制：将反应液与酶液按比例混合，分装至PCR反应管，全程置于冰盒中操作

添加模板：向每管加入cDNA模板，设置阴性对照(NTC)、阳性对照(PTC)和待测样品

扩增反应：运行荧光定量PCR程序（95℃预变性2-10分钟；95℃ 15秒→60℃ 30-60秒，循环40-45次）

质量控制要点

必须设置阴阳性对照：阳性对照应有典型S型扩增曲线且Ct值≤35，阴性对照应无扩增或Ct值＞38

严格分区操作：分为试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区，避免交叉污染

防污染措施：使用带滤芯吸头，实验后用10%次氯酸或75%酒精处理工作台

内参适用性验证：在实验条件下确认GAPDH表达稳定性，避免在某些病理状态下使用（如癌症组织中GAPDH可能上调）

四、数据分析与应用场景

相对定量计算方法

作为内参基因，GAPDH的Ct值用于计算目标基因的相对表达量：

ΔCt计算：ΔCt = Ct目标基因 - CtGAPDH

ΔΔCt计算：ΔΔCt = ΔCt实验组 - ΔCt对照组

相对表达量：2-ΔΔCt（假设扩增效率为100%）

主要应用场景

基因表达分析：在RT-qPCR实验中作为内参，校正样本间差异，实现不同样本间基因表达水平的比较

病原体检测：在病毒或细菌核酸检测中，作为内源性对照，监控样本采集、运输和核酸提取过程，判断检测结果是否可靠（即确保阴性结果是真实的，而非操作失误导致）

转基因检测：在转基因成分检测中作为物种特异性内参，确认样本中存在目标物种DNA

药物研发：评估药物处理对基因表达的影响，作为标准化参照

公司正在出售的产品：

应用场景与产品选择建议

科研领域：

常规PCR试剂盒。

临床诊断：

探针法qPCR试剂盒（如牛白血病病毒，灵敏度100拷贝/反应）。

现场检测：

恒温扩增试剂盒（如LAMP法，90分钟出结果）