驴源性成分(Don)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

 产品介绍：

驴源性成分(Don)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)是一种基于TaqMan探针技术的高特异性检测工具，通过实时监测荧光信号实现对食品、饲料及药品中驴源性成分的精准鉴定，检出限可达0.1%，特别适用于阿胶制品真实性验证和肉类掺假检测。

一、检测原理与技术特点

该试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，针对驴源性成分特异性基因（如线粒体DNA的D-loop区或ND5基因）设计引物和荧光探针。在PCR扩增过程中，当探针与目标DNA序列结合后，聚合酶在延伸时会降解探针，释放出FAM荧光信号，通过实时监测荧光强度变化，可实现对驴源性成分的定性检测。部分高端试剂盒采用双重或三重荧光PCR技术，可同时检测驴、马、牛等多种动物源性成分，显著提高检测效率。

二、产品性能与规格

性能指标  参数说明

检测方法  实时荧光PCR法（TaqMan探针法）

检测限  通常为0.1%（质量分数），部分高灵敏度产品可达0.01%

特异性  专一性检测驴源性成分，不与马、牛、猪等其他畜禽物种发生交叉反应

规格  48T/盒、50T/盒（不同品牌规格略有差异）

保存条件  -20℃±5℃避光保存，避免反复冻融

有效期  12个月（不同品牌可能存在差异）

适用仪器  ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LightCycler等实时荧光PCR仪

三、操作流程与结果判读

核心操作步骤

样本处理：取0.1g均匀样品，采用液氮研磨或均质器均质，使用磁珠法或离心柱法提取DNA

加样：向反应管中加入5μL提取的DNA模板，盖紧管盖，避免气泡

试剂配制：将反应液与酶液按比例混合，分装至PCR反应管

加样：向反应管中加入5μL提取的DNA模板，盖紧管盖，避免气泡

PCR扩增：使用荧光定量PCR仪，设置基线循环6-15，阈值设为阴性对照信号10倍

推荐PCR扩增程序

步骤  循环数  温度  时间  荧光收集

预变性  1 cycle  95℃  2-10 min  否

变性  40-45 cycles  95℃  15 sec  否

退火/延伸  40-45 cycles  60℃  30-60 sec  是

结果判读标准

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈典型"S"型

阴性：Ct值>35或无Ct值，曲线为直线或轻微斜线

无效检测：阴性对照出现扩增曲线或阳性对照无扩增曲线

四、应用场景与质量控制

主要应用场景

食品真实性验证：检测宣称"纯驴肉"或"阿胶"产品中是否掺入其他动物成分

药品质量控制：确保阿胶等传统药材原料真实性（药典规定阿胶必须采用驴皮熬制）

饲料安全监测：防范饲料中非法添加驴源性成分

进出口检验：满足国际贸易中动物源性成分标识要求

质量控制要点

必须设置阴阳性对照：每次实验需包含阴性对照(NTC)和阳性对照(PTC)

严格分区操作：试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区物理隔离，避免交叉污染

使用无核酸酶耗材：采用带滤芯吸头，不同区域使用独立工具

样本保存：避免反复冻融，运输时2-8℃冰袋保存

五、相关标准与注意事项

现行相关标准

GB/T 38164-2019《常见畜禽动物源性成分检测方法 实时荧光PCR法》

GB/T 21107-2025《饲料中马、驴源性成分的测定》，2026-01-01实施，代替GB/T 21107-2007

国家标准计划20255557-Z-469《分子生物标志物分析 动物源性制品中源性成分检测 实时荧光PCR法 第7部分：驴DNA检测方法》，等同采用ISO/TS 20224-7:2020311

检测方法局限性

当样本中驴源性成分含量低于检出限（如低于0.1%）时，可能会产生假阴性结果

样本在采集、运输、储存过程中操作不当易造成DNA降解，产生假阴性

实验过程中若发生交叉污染，则容易得到假阳性结果

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注意事项

实验操作规范

严格分区操作：试剂配制区、样本处理区、扩增区需物理隔离，防止气溶胶污染。

每次实验需设置阴性对照（无模板DNA）、阳性对照（已知PAT基因样本）及空白对照（仅缓冲液）。

加样时避免过量或不足，推荐低容量反应管以提高热传导率。

污染防控

定期监测实验室空气、加样枪及仪器表面污染，可通过擦拭采样后扩增验证。

扩增产物需在专用区域处理，避免开盖时形成气溶胶污染。