丙酮酸（PA)含量测试盒 新品

丙酮酸（PA)含量测试盒

测定意义与原理

测定意义

丙酮酸（PA）是糖酵解途径的关键中间产物，也是连接糖酵解、三羧酸循环和脂肪代谢的重要节点。其含量测定在临床诊断、医学研究和生命科学研究中具有重要意义：临床诊断：诊断和监测糖尿病、乳酸酸中毒、酒精中毒、肝功能异常等疾病监测：评估细胞能量代谢状态、组织损伤程度和治疗效果生物学研究：了解细胞代谢途径、细胞凋亡和细胞增殖机制药物研发：筛选代谢调节剂，用于治疗代谢相关疾病和癌症食品检测：评估食品发酵程度和新鲜度

测定原理

在碱性条件下，2,4-二硝基苯肼与丙酮酸反应生成丙酮酸二硝基苯腙，产物在酸性条件下显棕红色，颜色深浅与丙酮酸含量成正比，通过在500nm测定吸光度即可计算出样本中丙酮酸的含量。反应式如下： 丙酮酸+2,4-二硝基苯肼→碱性条件丙酮酸二硝基苯腙丙酮酸+2,4-二硝基苯肼碱性条件丙酮酸二硝基苯腙 丙酮酸二硝基苯腙→酸性条件棕红色产物丙酮酸二硝基苯腙酸性条件棕红色产物

试剂盒组成

组分 规格 作用说明

试剂一 25mL/50mL/100mL×1瓶 含提取液，用于提取样本中的丙酮酸

试剂二A 100mL/200mL×1瓶 含碱性溶液，用于提供碱性反应环境

试剂二B 25mL/50mL/100mL×1瓶 含2,4-二硝基苯肼，反应底物

试剂三 25mL/50mL/100mL×1瓶 含酸性溶液，用于提供酸性显色环境

标准品 1mL×1支 含2μmol/mL丙酮酸标准液，用于建立标准曲线

使用说明书 1份 详细操作指南和注意事项

自备仪器与试剂

必备仪器

比色法/紫外分光光度法：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、恒温水浴锅、可调式移液器、研钵、电子天平

微量法：酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅、可调式移液器、研钵、电子天平

必备耗材

离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器、漏斗、滤纸

自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、三氯乙酸

样本前处理方法

动植物组织样本取样：称取约0.1g组织，用生理盐水洗净，滤纸吸干匀浆：加入0.9mL试剂一，冰浴匀浆离心：8000g 4℃离心10min，取上清稀释：取0.1mL上清液，加入0.9mL试剂一，充分混匀蛋白沉淀：取0.5mL上述液，加入0.5mL三氯乙酸（10%），充分混匀，室温静置10min过滤：用滤纸过滤，滤液用于丙酮酸含量测定蛋白浓度测定：用考马斯亮蓝法或BCA法测定样本蛋白浓度

细胞/细菌样本收集：收集1~5×10⁶细胞，离心弃上清，加入1mL试剂一匀浆：冰浴匀浆或超声波破碎离心：8000g 4℃离心10min，取上清蛋白沉淀：取0.5mL上清液，加入0.5mL三氯乙酸（10%），充分混匀，室温静置10min过滤：用滤纸过滤，滤液用于丙酮酸含量测定

血清/血浆样本稀释：取0.1mL血清/血浆，加入0.9mL试剂一，充分混匀蛋白沉淀：取0.5mL上述液，加入0.5mL三氯乙酸（10%），充分混匀，室温静置10min过滤：用滤纸过滤，滤液用于丙酮酸含量测定

测定操作步骤

仪器预热：分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到500nm，蒸馏水调零工作液配制：临用前将试剂二A与试剂二B按1:1比例混合，充分混匀标准曲线绘制：

试剂名称(mL) 空白管 标准1管 标准2管 标准3管 标准4管

试剂一 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1

标准品 0 0.1 0.2 0.3 0.4

工作液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

充分混匀，37℃水浴15min

各管加入试剂三5mL，充分混匀，静置10min

500nm波长下测定各管吸光度，绘制标准曲线样品测定：

试剂名称(mL) 测定管

样品滤液 0.5

工作液 0.5

充分混匀，37℃水浴15min

加入试剂三5mL，充分混匀，静置10min

500nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算样本中丙酮酸含量

结果计算方法

单位定义

μmol/mg prot：每毫克组织蛋白中丙酮酸的含量

μmol/g 鲜重：每克鲜重样本中丙酮酸的含量

μmol/mL：每毫升样本中丙酮酸的含量

计算公式

丙酮酸含量(μmol/g鲜重)=C测定W×F×1000丙酮酸含量(μmol/g鲜重)=W×FC测定×1000 丙酮酸含量(μmol/mg prot)=C测定Cpr×F丙酮酸含量(μmol/mg prot)=Cpr×FC测定 丙酮酸含量(μmol/mL)=C测定F丙酮酸含量(μmol/mL)=FC测定

C测定：根据测定管吸光度从标准曲线查得的丙酮酸浓度（μmol/mL）

W：样本质量（g）

Cpr：样本蛋白浓度（mg/mL）

F：稀释倍数

性能指标

指标 比色法/紫外分光光度法/微量法

线性范围 0~0.8μmol/mL

最低检测限 ≤0.01μmol/mL

回收率 90%~110%

批内精密度 CV≤5.0%

批间精密度 CV≤8.0%

稳定性 2-8℃保存6-12个月

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免丙酮酸降解；-20℃可保存3个月

组织样本需冰浴匀浆，避免酶失活导致丙酮酸含量变化

蛋白沉淀步骤需充分，避免蛋白干扰显色反应

若样本吸光值超出标准曲线范围，需稀释样本后重新测定

试剂使用：

工作液临用前配制，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融

不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线

标准品需4℃保存，避免反复冻融

测定过程：

反应温度需严格控制在37℃，反应时间15分钟

加入试剂后需充分混匀，确保反应完全

显色后需在10-30分钟内完成吸光度测定，避免颜色褪去

质量控制：

每次实验需设置空白对照和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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