甲醛脱氢酶（FDH）测试盒 新品

商品属性

测定意义与原理

测定意义

甲醛脱氢酶（FDH，EC1.2.1.46）是甲醛解毒途径的关键酶，主要功能包括：甲醛解毒：催化甲醛氧化为甲酸，是生物体内甲醛代谢的核心步骤环境适应：帮助微生物在甲醛污染环境中生存，具有生物修复潜力工业应用：用于甲醛生物传感器、生物催化合成等领域病理关联：FDH活性异常与甲醛中毒、神经系统疾病等相关

测定原理

FDH催化甲醛与NAD+反应生成NADH，反应式如下： 甲醛+NAD++H2O→FDH甲酸+NADH+H+甲醛+NAD++H2OFDH甲酸+NADH+H+ NADH在340nm处有特征吸收峰，通过监测吸光度变化计算酶活性。

自备仪器与试剂

必备仪器

紫外分光光度计/酶标仪（具备340nm检测通道）

台式高速离心机（最大转速≥12000g）

恒温水浴锅（控温精度±0.5℃）

可调式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）

超声破碎仪（用于细胞/细菌样本处理）

必备耗材

1mL石英比色皿/96孔紫外板

离心管（1.5mL、10mL）

一次性吸头（无菌无酶）

研钵/组织匀浆器（冰浴专用）

自备试剂

蒸馏水/去离子水

生理盐水（用于样本稀释）

液氮（用于样本速冻保存）

样本前处理方法

组织样本（动植物）新鲜样本取材后立即液氮速冻，-80℃保存；避免反复冻融称取0.05-0.1g组织，按1:5-10（W/V）比例加入预冷提取液冰浴匀浆（转速1000-1500rpm，时间5-10min）转移至离心管，12000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测若酶活性过高，可用提取液稀释后测定（建议稀释倍数1-10倍）

细胞/细菌样本收集对数生长期细胞（密度1×10^6/mL）或细菌（OD600=0.6-0.8）8000g 4℃离心5min，弃上清，用生理盐水洗涤2次按500万细胞/细菌加入1mL提取液的比例重悬冰浴超声破碎（功率30%，超声5s，间隔10s，重复20次）12000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测

环境样本（土壤、水体）土壤样本：称取1g新鲜土壤，加入5mL提取液，震荡提取30min水体样本：直接取上清液，若浑浊需3000g离心5min后取上清环境样本需过滤去除杂质，避免干扰吸光度测定

测定操作步骤

紫外分光光度法流程

试剂准备：

从4℃取出试剂盒，室温平衡20min

冻干粉试剂：临用前按说明书加入蒸馏水溶解

试剂工作液：按比例混合试剂A、B，现配现用

空白管设置：

取比色皿，依次加入：提取液900μL + NAD+溶液50μL + 蒸馏水50μL

37℃预温育5min，记录340nm处初始吸光度A0

样本测定：

另取比色皿，依次加入：提取液900μL + NAD+溶液50μL + 样本50μL

37℃预温育5min，加入底物溶液20μL立即混匀

连续记录1min（A1）和2min（A2）时的吸光度值

计算ΔA：ΔA = (A2 - A1) （吸光度每分钟增加量）

微量法（酶标仪）流程96孔板每孔加入：提取液90μL + NAD+溶液5μL + 样本5μL37℃预温育5min，加入底物溶液2μL立即混匀设置动力学模式，340nm处连续读取10个循环（每1min读取1次）计算吸光度增加速率（ΔA/min）

酶活力计算方法

单位定义

U/mL：每mL样本每分钟生成1μmol NADH的酶量

U/mgprot：每mg组织蛋白每分钟生成1μmol NADH的酶量

U/g鲜重：每g组织鲜重每分钟生成1μmol NADH的酶量

计算公式

FDH活性=ΔA×V反总×V样总ε×d×V样测×T×CFDH活性=ε×d×V样测×T×CΔA×V反总×V样总

ΔA：吸光度变化值（A2 - A1）

V反总：反应体系总体积（1.0mL）

V样总：样本提取液总体积（mL）

ε：NADH摩尔消光系数（6.22×10³ L/(mol·cm)）

d：比色皿光径（1cm）

V样测：测定时加入的样本体积（0.05mL）

T：反应时间（1min）

C：样本浓度（蛋白浓度mg/mL、组织鲜重g/mL）

简化公式

血清/血浆样本：FDH（U/mL）= 3.22 × ΔA

组织样本（蛋白浓度）：FDH（U/mgprot）= 3.22 × ΔA ÷ Cpr

组织样本（鲜重）：FDH（U/g鲜重）= 3.22 × ΔA ÷ W

注意事项

样本处理：

样本需新鲜制备，避免甲醛挥发；密封冷藏可保存24h

甲醛对酶有抑制作用，样本处理时需避免外源甲醛污染

环境样本需去除杂质，避免干扰吸光度测定

试剂使用：

NAD+溶液对光敏感，配制后需避光保存，24小时内用完

冻干粉试剂需现配现用，避免反复冻融

不同批号试剂禁止混用，需重新绘制标准曲线

测定过程：

反应温度需严格控制在37℃（酶促法最适温度）

若ΔA值超出标准曲线范围，需调整稀释倍数重新测定

每个样本需设置平行实验，结果取平均值

质量控制：

每次实验需设置空白对照（蒸馏水替代样本）和质控样本

若结果偏差较大，需检查试剂是否失效或样本处理是否正确

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