基孔肯尼雅病毒染料法荧光定量 RT-PCR试剂盒 YB7E39301 新品

基孔肯尼雅病毒染料法荧光定量 RT-PCR试剂盒

Chikungunya Virus(CHIKV) SYBR qRT-PCR Kit

产品及特点： 基孔肯尼雅病毒(Chikungunya Virus，CHIKV)是一种 RNA 病毒，会引起基孔肯雅病，发热病人常突然起病，寒战、发热，体温可达 39℃，伴有头痛、恶心、呕吐、食欲减退，淋巴结肿大。一般发热 1~7 天即可退热，约 3 天后再次出现较轻微发热，持续 3~5 天恢复正常，有些患者可有结膜充血和轻度结膜炎表现，关节疼痛与发热同时，患者全身的多个关节和脊椎出现十分剧烈的疼痛，且病情发展迅速，往往在数分钟或数小时内关节功能丧失，不能活动，因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。本产品基于 PCR 原理开发。

它具有下列特点：

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，只需要提供 RNA 样品。

2. 基于染料法 qRT-PCR 检测，灵敏度比常规 RT-PCR 高 10-100 倍，可以达到至少 100拷贝/反应。

3. 根据基孔肯尼雅病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性，不会跟其它生物的RNA 发生交叉反应。

4. 涵盖性好，能扩增检测出基孔肯尼雅病毒的大多数亚型。

5. 使用一管式 qRT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

6. 本产品既可用于定性检测，也可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少有 5 个数量级。

7. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR 反应8. 只能用于科研，不能用于临床。

规格及成分：

运输及保存： 低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：样品 RNA、超纯水、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。 

使用方法： 一、稀释标准曲线样品（以 10E1-10E6 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供 RNA 片段作为阳性对照。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。

1. 标记 5 个离心管，分别为 6，5，4，3，2,1。

2. 用带芯枪头分别加入 45μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。

3. 在 6 号管中加入 5μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在 5 号管中加入 5μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在 4 号管中加入 5μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1 分钟，得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品，放冰上待用。

二、样品 RNA 的制备 

7. 如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是样品制备 PC（样品制备阳性对照），一个是样品制备 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为样品制备 PC。另外用水作为样品制备 NC。

8. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。 

三、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行） 

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），5 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用试剂盒提供的阳性对照的 10000 倍稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）： 

11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 RT-PCR：

四、数据处理

12. 通过溶解曲线分析的结果排除无效数据。有 Ct 值，但 Tm 值跟阳性对照 Tm 不一样的样品（包括对照和待测样品），归为假阳性，数据无效，不予以分析。Tm 跟阳性对照 Tm一致的，为有效 Ct。

13. 如果两种阴性对照的溶解曲线所得 Tm 值跟阳性对照的 Tm 值一样，说明环境或试剂可能有过去的 qRT-PCR 扩增产物污染，则此次实验无效，需要解决污染问题再进行实验。

14. 如果两种阴性对照（样品制备阴性对照和 qRT-PCR 阴性对照）是假阳性，可以继续分析其它样品有效数据。

15. 对定量检测，以阳性对照样品的浓度的 log 值为横轴，以有效 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的有效 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA 浓度的 log 值，再换算出待测样品的 RNA 浓度。

16. 对定性检测，则有有效 Ct 值的为阳性，无有效 Ct 值的为阴性。

本产品仅供科研使用.请勿用于医药,不能用于临床治疗诊断使用！

以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。