牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）核酸检测试剂盒(荧光PCR法) 新品

产品介绍：

RSV是引起牛呼吸道疾病综合征（BRDC）的主要病原之一，尤其在犊牛中可导致严重的支气管肺炎。荧光PCR法因其高灵敏度和特异性，是目前临床确诊和流行病学监测的首选方法。

1. 核心检测原理

该试剂盒通常采用TaqMan荧光探针法（探针法）。

靶点基因： 针对BRSV基因组中的保守区域设计特异性引物和探针。根据最新研究，常靶向N基因（核衣壳蛋白基因）或F基因（融合蛋白基因），其中N基因因其高度保守性而被广泛采用。

检测机制： 提取样本RNA后，通过一步法荧光RT-PCR进行扩增。若样本中含有BRSV的RNA，探针被切割释放荧光信号（通常为FAM通道），仪器实时监测并判断结果。

2. 试剂盒的关键性能指标

根据现有产品数据及2025年最新研究，该类试剂盒具备以下特点：

高特异性： 仅针对BRSV反应，不与牛副流感病毒3型（BPIV3）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）等其他牛呼吸道病原体发生交叉反应。

高灵敏度： 检测下限通常可达 10² copies/mL（部分产品可达164拷贝/反应），能够检出早期或隐性感染。

检测时间： 全程（含RNA提取）约 2小时。

3. 试剂盒组成（典型配置）

一个标准的50T（次）试剂盒通常包含以下组分：

组分名称  作用  保存条件

PCR反应液  含dNTPs、Mg²⁺、缓冲液、引物/探针  -20℃ 保存

酶混合液  含逆转录酶和Hot Start Taq DNA聚合酶  -20℃ 保存

阳性对照  含BRSV靶基因的质粒或体外转录RNA  -20℃ 保存

阴性对照  无核酸酶水  2-8℃ 保存

4. 适用样本类型

鼻拭子/咽拭子： 最常用的检测样本，用于监测呼吸道携带者。

肺脏组织/气管抽吸物： 用于病死牛的剖检确诊。

支气管肺泡灌洗液（BAL）： 用于深部呼吸道感染的检测。

结果判读标准（参考）

阳性（+）： FAM通道出现典型的S型扩增曲线，且 Ct值 ≤ 35-38（具体阈值依厂家说明书而定），表明样本中存在BRSV核酸。

阴性（-）： 无Ct值，或Ct值 > 38/。

可疑（±）： Ct值在临界值附近（如35-38），建议复检。

6. 临床与应用意义

早期诊断： 在牛群出现咳嗽、流涕等临床症状时即可检出，早于抗体产生。

混合感染检测： BRSV常与BPIV3、BVDV等混合感染，PCR检测能明确病原构成。

流行病学调查： 用于监测疫区病毒的流行情况。

特别提示

多重检测： 市面上已有成熟的BRSV与BPIV3多重荧光PCR检测试剂盒，可同时检测两种病毒，提高诊断效率并降低成本。

样本保存： 由于BRSV是RNA病毒，RNA极易降解，采样后应尽快冷冻保存（-70℃最佳），避免反复冻融。

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通用操作流程与注意事项：

1. 样本制备

使用核酸提取试剂盒纯化DNA/RNA，需设置阳性、阴性对照。

关键点：避免交叉污染，阳性对照单独存放。

2. 反应体系配置

常规PCR：引物、dNTPs、Taq酶、模板DNA。

qPCR：需额外加入探针或染料。

3. 扩增程序

常规PCR：

预变性→循环扩增→延伸

qPCR：

预变性→循环扩增（荧光采集）

4. 结果判读

常规PCR：电泳观察条带大小（如阳性对照需出现预期条带）。

qPCR：Ct值≤35为阳性，阴性对照无信号。