马传染性子宫炎（CEM）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

产品介绍：

这是一种用于检测马生殖泰勒菌（Taylorella equigenitalis）的高灵敏度分子诊断试剂，是马属动物进出口检疫和繁殖障碍排查的必备工具。

1. 核心用途与背景 ��

针对疾病：马传染性子宫炎（Contagious Equine Metritis, CEM）。这是一种由马生殖泰勒菌引起的高度接触性传染病，主要导致母马子宫内膜炎、流产及公马无症状带菌。

检测靶标：试剂盒通常针对马生殖泰勒菌基因组中的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针，常见的靶标基因为16S rRNA基因或ITS（间隔区）序列。

适用样本：适用于生殖道拭子（子宫颈、阴道、包皮囊）、尿道冲洗液及配种后分泌物。

2. 检测原理与技术 ��

技术方法：实时荧光定量PCR法（TaqMan探针法）。

原理：利用特异性探针（通常标记FAM荧光素）与目标DNA序列结合。在PCR扩增过程中，Taq酶的5'→3'外切酶活性会切断探针，释放荧光信号。仪器实时监测荧光信号的累积，从而实现对马生殖泰勒菌核酸的定性检测。

优势：相比传统的细菌培养法（该菌为苛养菌，培养难度大），PCR法具有灵敏度高、特异性强、检测速度快的优势，且不受细菌活力影响，能有效检出带菌动物。

3. 主要性能参数 ��

性能指标  参数详情  备注

检测限  1×10³ 拷贝/mL  灵敏度高，可检出微量感染

特异性  100%  不与马源其他细菌（如大肠杆菌、葡萄球菌）交叉反应

检测时间  约 1.5 - 2 小时  含核酸提取及扩增过程

包装规格  50T/盒  也有25T规格

储存条件  -20℃  避光保存，避免反复冻融

有效期  12个月  具体以产品说明书为准

4. 结果判读标准 ��

阳性（+）：

FAM荧光通道出现典型的S型扩增曲线。

Ct值 ≤ 35（部分厂家标准为38）。

结论：样本中检出马生殖泰勒菌核酸。

阴性（-）：

FAM通道无Ct值，或Ct值 > 38，且无指数增长期。

无效实验：

阳性对照未扩增（Ct值 > 35）。

阴性对照出现扩增曲线。

温馨提示

检疫核心：马传染性子宫炎是OIE要求申报的法定传染病。荧光PCR法是目前国际公认的高灵敏度检测手段，建议在配种前及进出口检疫中优先使用。

采样关键：由于该病原体主要定植于生殖道黏膜，采样时务必使用无菌棉签充分擦拭子宫颈或包皮囊，以提高检出率。

治疗建议：若检测阳性，母马通常采用子宫灌注（如双氯双胍乙烷）配合抗生素治疗；公马需清洗包皮并局部用药，治疗后需连续3次PCR检测阴性方可解除隔离。

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通用操作流程与注意事项：

1. 样本制备

使用核酸提取试剂盒纯化DNA/RNA，需设置阳性、阴性对照。

关键点：避免交叉污染，阳性对照单独存放。

2. 反应体系配置

常规PCR：引物、dNTPs、Taq酶、模板DNA。

qPCR：需额外加入探针或染料。

3. 扩增程序

常规PCR：

预变性→循环扩增→延伸

qPCR：

预变性→循环扩增（荧光采集）

4. 结果判读

常规PCR：电泳观察条带大小（如阳性对照需出现预期条带）。

qPCR：Ct值≤35为阳性，阴性对照无信号。