猪蓝耳病病毒经典型(PRRSV-C)核酸检测试剂盒(荧光PCR法) 新品

产品介绍：

以下是关于该试剂盒的详细技术解析和应用说明：

1. 核心检测原理

该试剂盒通常采用TaqMan荧光探针法。

靶点设计： 针对PRRSV病毒基因组的高度保守区域（如ORF6/M基因或其它特异性区域）设计特异性的引物和探针。

检测机制： 在PCR扩增过程中，如果样本中含有PRRSV-C的RNA模板，探针会被特异性切割，释放出荧光信号。仪器实时监测荧光信号的增加，从而实现对病毒核酸的定性检测（判断阴阳性）。

2. 试剂盒的主要组成

一个标准的试剂盒通常包含以下组分（具体体积和酶体系可能因厂家略有不同）：

组分名称  作用  备注

反应液 (Mixture)  含dNTPs、Mg²⁺、缓冲液  核心反应体系

酶混合液  含逆转录酶（RT）和DNA聚合酶（Taq）  一步法RT-PCR的关键

阳性对照 (Positive Control)  含已知PRRSV-C靶基因的质粒或灭活病毒  用于验证实验是否成功

阴性对照 (Negative Control)  灭菌纯水或不含模板的溶液  监控是否存在污染

说明书  操作指南及判读标准  必须严格遵守

3. 关键性能指标

特异性 (Specificity)： 仅针对PRRSV经典型（如VR-2332株等）产生阳性信号，不会与其他猪病（如猪圆环病毒、伪狂犬病毒）或高致病性蓝耳病病毒（HP-PRRSV）发生交叉反应。

灵敏度 (Sensitivity)： 检测下限通常很高，部分产品可检测到 10 copies/μL 甚至更低浓度的病毒核酸，确保能发现早期或低浓度的感染。

适用样本： 通常适用于血清、血浆、肺脏组织、淋巴结、扁桃体等临床样本。

4. 操作流程简述

使用该试剂盒通常分为三个主要步骤：

核酸提取： 使用配套或指定的RNA提取试剂盒，从临床样本（如血清或组织研磨液）中提取总RNA。

反应体系配制： 在试剂准备区，将反应液、酶混合液、提取的RNA模板（及对照品）按比例混合。

上机扩增与分析：

将反应管放入荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX96等）。

设置程序：通常包括逆转录（50℃左右）、预变性（95℃）和PCR扩增（40个循环左右，如95℃变性，55℃-60℃退火延伸）。

结果判读： 根据扩增曲线和Ct值（阈值循环数）进行判定。

5. 结果判读标准（参考）

阳性： FAM荧光通道出现明显的S型扩增曲线，且Ct值 ≤ 35（或厂家设定的阈值），表明样本中存在PRRSV-C病毒核酸。

阴性： 无Ct值或Ct值 > 38（或无效），且阴性对照正常。

可疑： Ct值在35-38之间，建议重复检测或重新采样。

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通用操作流程与注意事项：

1. 样本制备

使用核酸提取试剂盒纯化DNA/RNA，需设置阳性、阴性对照。

关键点：避免交叉污染，阳性对照单独存放。

2. 反应体系配置

常规PCR：引物、dNTPs、Taq酶、模板DNA。

qPCR：需额外加入探针或染料。

3. 扩增程序

常规PCR：

预变性→循环扩增→延伸

qPCR：

预变性→循环扩增（荧光采集）

4. 结果判读

常规PCR：电泳观察条带大小（如阳性对照需出现预期条带）。

qPCR：Ct值≤35为阳性，阴性对照无信号。