犬血巴尔通体探针法荧光定量PCR试剂盒

犬血巴尔通体探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于犬血样本中巴尔通体（Bartonella spp.）的定性或定量检测。通过特异性引物和探针靶向巴尔通体保守基因序列，结合内参基因（如GAPDH）实现高灵敏度、高特异性检测，并支持全流程质控。

检测原理

靶标设计：针对巴尔通体保守基因（如gltA）设计引物及TaqMan探针，确保覆盖不同亚型。

荧光信号：探针5'端标记FAM荧光基团，3'端淬灭基团，PCR扩增时释放荧光信号，通过Ct值定量分析。

内标系统：内置GAPDH基因或人工合成内标，避免假阴性。

试剂盒组成

预混反应液：含dNTPs、酶、缓冲液等（冻干微球或液体形式）。

阳性对照：1×10^5 copies/μL 巴尔通体标准品。

阴性对照：无核酸酶水。

核酸提取试剂（可选）：兼容柱式或免提方法。

操作步骤

1. 样本处理

采集与保存：全血/血浆样本常规采集，-20℃保存（运输需泡沫箱加冰）。

核酸提取：推荐使用配套提取试剂或市售RNA/DNA提取试剂盒。

2. 标准曲线制备

将阳性对照梯度稀释（10^5至10^0 copies/μL），分装6管，冰上保存。

每稀释度重复3次，确保线性范围（R²≥0.99）。

3. PCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| 预混反应液 | 15 |

| 模板DNA/RNA | 5 |

程序设置：

95℃ 5min（预变性）→ 95℃ 10s，60℃ 30s（40循环，荧光采集）。

4. 质控要求

阴性对照：Ct≥40或无扩增。

阳性对照：Ct≤36且呈典型S型曲线。

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤36，扩增曲线正常。

可疑：36<Ct<40，需复测。

阴性：Ct≥40或无扩增。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需独立区域。

防污染措施：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%酒精清洁台面。

试剂保存：避光、避免反复冻融，反应液需完全混匀后离心。

交叉反应：已验证与常见犬猫病原体（如犬细小病毒、猫冠状病毒等）无交叉。

性能参数

灵敏度：50 copies/Test。

特异性：100%（临床验证262例样本）。

稳定性：-20℃保存12个月。

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