苹果锈果类病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

苹果锈果类病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量RT-PCR技术，专用于苹果锈果类病毒（Applescarskinviroid, SSV）的定性与定量检测。适用于科研用途，具有高灵敏性、高特异性及即开即用特点。

产品规格

规格：50次/盒（20μL反应体系）

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；阳性对照需单独存放，避免污染。

运输方式：低温泡沫箱加冰密封运输。

检测原理

通过特异性引物和探针靶向SSV保守序列，在荧光定量PCR仪中实时监测扩增信号，结合标准曲线实现病毒RNA的绝对定量或定性分析。

试剂盒组成

RT-PCR预混液（含逆转录酶、Taq DNA聚合酶、dNTPs等）

阳性对照（无传染性DNA片段，浓度1×10^7拷贝/μL）

荧光RT-PCR专用模板稀释液

阴性对照（无RNA酶水）

注：具体组分以实际货品说明书为准，需联系供应商获取详细清单。

操作步骤

标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记6管（6至1号），每管加45μL稀释液。

6号管加入5μL阳性对照（1×10^7拷贝/μL），涡旋混匀，得到1×10^6拷贝/μL标准品。

依次稀释至1号管（1×10^1拷贝/μL），每步更换枪头，冰上保存。

样本RNA提取

使用兼容的RNA提取试剂盒或柱式法纯化样本RNA，推荐设置阴性/阳性提取对照（NC/PC）。

qRT-PCR反应（20μL体系）

按比例配置反应液（预混液+引物探针+模板）。

加样：

待测样本、阴性对照（水）、阳性对照（标准曲线梯度）。

程序设置：

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 5分钟

扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（40循环）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤36，典型扩增曲线；

阴性：Ct≥40；

可疑值（36<Ct<40）需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

防护措施：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%乙醇消毒台面。

适用范围：仅限科研，不适用于临床诊断。

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