续断探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，采用探针法原理：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：荧光强度与扩增产物量成正比，通过Ct值（阈值循环数）实现续断RNA的定量或定性检测。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物及探针针对续断高度保守序列设计，避免交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶及引物探针，用户仅需提供RNA模板。

内控设计：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL），区分假阴性结果。

适用范围：科研用途，不可用于临床诊断。

试剂盒组成

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |

| 试剂二 | 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |

| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 试剂四 | 续断探针法qRT-PCR引物混合液 | 100 μL |

| 试剂五 | 续断qRT-PCR探针 | 50 μL |

| 试剂六 | 续断阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL |

实验步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2–10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。

2. RNA提取

自备样品RNA，建议使用柱式提取法，确保纯度（A260/A280≈2.0）。

3. qRT-PCR反应（20 μL体系）

反应体系：

缓冲液10 μL + 酶混合液2 μL + 探针1 μL + 引物混合液2 μL + RNA模板5 μL。

循环程序：

逆转录：50℃ 30 min → 预变性：94℃ 10 min → 扩增（40循环）：94℃ 15 sec，60℃ 1 min（采集FAM信号）。

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型；

阴性：Ct≥40或无扩增；

可疑结果（35<Ct<40）需复测。

注意事项

操作需在无菌环境下进行，避免RNase污染。

试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融。

实验废弃物需按生物安全规范处理。

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