血竭探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品用途

专用于血竭（Sanguis draxonis/Daemonorops draco）的核酸定性或定量检测，仅限科研使用，不可用于临床。

技术原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。扩增时Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，通过荧光强度变化定量靶序列。

特异性：引物及探针针对血竭高度保守区设计，避免与其他物种交叉反应。

检测流程

反转录（若检测RNA）：将RNA模板逆转录为cDNA。

扩增与检测：实时监测荧光信号，生成扩增曲线和Ct值。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |

| 酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶、Taq酶等 |

| 荧光探针 | 50μL | 特异性结合靶序列 |

| 引物混合液 | 100μL | 扩增目标片段 |

| 阳性对照 | 50μL（1×10⁸拷贝/μL） | 验证实验有效性 |

| 模板稀释液 | 1mL | 标准品梯度稀释 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（定量分析）

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），用于建立标准曲线。

2. 样品处理

核酸提取：使用兼容的RNA/DNA提取试剂盒纯化样本，建议设置阴/阳对照。

反应体系配置（以20μL为例）：

模板DNA/RNA 5μL

缓冲液10μL、酶混合液2μL、探针1μL、引物2μL

3. PCR程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录（若需） | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增循环（40次） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光） |

4. 结果分析

定量：通过Ct值与标准曲线计算起始模板浓度。

定性：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct≥40或无扩增。

注意事项

分区操作：避免标准品与样本交叉污染。

质量控制：阴性对照需无扩增，阳性对照Ct≤30。

重复验证：Ct值在35-40需复测。

存储：试剂避光保存，避免反复冻融。

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