大麦黄矮病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

大麦黄矮病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量RT-PCR技术开发，专用于检测大麦黄矮病毒（Barley Yellow Dwarf Virus, BYDV）的RNA。适用于科研领域，不可用于临床诊断。产品具有高灵敏度、高特异性及宽线性范围（5个数量级），可同时支持定性和定量分析。

产品信息

规格：50次反应（20μL体系/次）

存储条件：-20℃避光保存，未开封保质期12个月。

运输条件：低温运输，避免反复冻融。

试剂盒组成

预混液：含优化引物、探针、dNTPs、酶等。

阳性对照：无传染性DNA片段（1×10^8拷贝/μL）。

阴性对照：DEPC-H₂O。

模板稀释液：用于标准曲线制备。

操作步骤

样本制备

RNA提取：使用兼容的核酸提取试剂纯化样本RNA，建议设置阴性/阳性对照管。

标准曲线稀释（定量分析需选）：

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。

qPCR反应设置

体系配制（20μL/反应）：

预混液：18μL

模板：2μL（样本/对照）

加样顺序：先阴性对照，再待测样本，最后阳性对照。

扩增程序

循环参数：

逆转录：50℃ 15分钟（RT步骤）。

预变性：95℃ 5分钟。

扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟，共40个循环。

荧光信号采集：设定于60℃延伸阶段。

结果判读

定量分析：

以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct值<35，S型扩增曲线。

可疑：Ct值35~38，需复检。

阴性：Ct值>38或无信号。

注意事项

分区操作：样本制备、试剂配制、扩增需在独立区域进行，避免交叉污染。

质量控制：每批次实验需包含阴性/阳性对照。

样本要求：RNA应避免降解，建议液氮或Trizol保存。

局限性：仅限科研使用，结果需结合其他方法验证。

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