草地贪夜蛾细胞基因组DNA残留探针法荧光定量PCR试剂盒(不含内参) 新品

草地贪夜蛾细胞基因组DNA残留探针法荧光定量PCR试剂盒(不含内参)

商品属性

产品概述

本产品是专为检测草地贪夜蛾(Sf9)细胞基因组DNA残留设计的探针法荧光定量PCR试剂盒，采用实时荧光定量PCR技术，可实现对DNA样品的高灵敏度定量和定性分析。本试剂盒不含内参，适用于科研用途。

产品规格

规格：50次20μL体系反应

保存条件：-20℃避光保存

保质期：1年

运输条件：低温运输

产品特点

即开即用设计，用户只需提供样品DNA模板

优化引物设计，灵敏度高，检测限可达1×10E2拷贝/μL

提供阳性对照，便于区分假阴性样品

特异性强，不会与其他生物样本DNA发生交叉反应

适用于定性和定量检测，定量线性范围达5个数量级

兼容大多数市售核酸提取试剂盒

实验原理

本试剂盒基于TaqMan探针技术原理，在PCR反应体系中加入特异性荧光探针。探针与靶序列特异性杂交后，在PCR扩增过程中被Taq酶水解，释放荧光信号，通过实时监测荧光信号积累来定量分析目标DNA。

试剂盒组分

qPCR预混液(含dNTPs、Taq DNA聚合酶等)

特异性引物对

TaqMan探针

阳性对照(1×10E8拷贝/μL)

DEPC-H2O(阴性对照)

使用方法

DNA提取(样本制备区)

使用自选方法提取纯化样品DNA，推荐使用市售核酸提取试剂盒。

标准曲线制备(样本制备区)

标记6支离心管(7-2号)

每管加入45μL DEPC-H2O

按10倍梯度稀释阳性对照，获得1×10E7至1×10E2拷贝/μL的标准品系列

若仅需定性检测，将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可

反应体系配制(试剂准备区)

计算所需反应管数(N个样品+1个阴性对照+6个阳性对照)

每管加入18μL预混液

转移至样本准备区

模板添加(模板添加区)

每管加入2μL相应模板

加样顺序：阴性对照→待测样品→阳性对照

短暂离心混匀

PCR扩增(扩增及产物分析区)

将反应管置于qPCR仪中

运行以下程序：

95℃ 10min(预变性)

95℃ 15sec → 60℃ 1min，40个循环

结果分析

定量分析

以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线

根据样品Ct值推算DNA浓度

定性分析

阳性对照：Ct值<30，典型S型扩增曲线

阴性对照：Ct值>38或无Ct值

样品判定：

阳性：Ct值<35，明显指数增长

阴性：Ct值>38或无Ct值

可疑：Ct值35-38，需复检

注意事项

实验操作需在分区(样本制备区、试剂准备区、扩增区)进行，避免污染

使用前所有组分需完全融化，混匀并短暂离心

反应液需避光保存，避免气泡产生

使用一次性吸头、手套和专用工作服

实验后使用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台

阳性对照需单独存放，防止污染其他组分

本产品仅限科研使用

质量控制

阴性对照：Ct值应>38或无Ct值

阳性对照：Ct值应<30

标准曲线相关系数R²应≥0.98

扩增效率应在90-110%之间

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