巴斯德毕赤酵母细胞基因组DNA残留探针法荧光定量PCR试剂盒(不含内参) 新品

巴斯德毕赤酵母细胞基因组DNA残留探针法荧光定量PCR试剂盒(不含内参)

商品属性

预期用途

本试剂盒基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术，专用于检测生物制品或科研样本中巴斯德毕赤酵母细胞基因组DNA残留量，适用于生产质量控制或科研分析。检测结果需结合其他指标综合判断，不可用于临床诊断。

检验原理

通过针对巴斯德毕赤酵母基因组DNA保守区域设计的特异性引物及探针，在PCR扩增过程中释放荧光信号，实时监测扩增曲线，实现定性或定量分析。灵敏度可达0.01 pg/μL，线性范围覆盖5个数量级。

试剂组成

2×Probe qPCR MasterMix（0.5 mL）

荧光PCR专用模板稀释液（1 mL）

超纯水（1 mL）

qPCR引物-探针干粉（50次反应，需用165 μL超纯水复溶）

阳性对照（1000 pg/μL，50 μL）

阴性对照（50 μL）

说明书（1份）

储存条件及有效期

-20℃避光保存，避免反复冻融（≤7次），有效期12个月。

适用仪器

兼容ABI、MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等主流荧光定量PCR仪。

自备耗材与设备

无核酸酶离心管（0.2 mL PCR管、1.5 mL离心管）

滤芯吸头（10 μL、200 μL、1000 μL）

离心机、振荡器、移液器

样品要求

样本类型：细胞培养物、发酵液或纯化后的生物制品。

保存条件：短期-20℃，长期-70℃（避免反复冻融）。

运输：2~8℃冰袋运输。

操作步骤

1. DNA提取

使用商品化核酸提取试剂盒（推荐配套病毒基因组DNA提取试剂盒），提取后模板保存于-15℃以下。

2. 标准曲线制备（定量分析需选）

将阳性对照（1000 pg/μL）按10倍梯度稀释至0.01 pg/μL，共6个浓度点。

稀释需在独立区域操作，避免交叉污染。

3. 反应体系配制（20 μL/反应）

| 成分 | 体积（μL） |

| 2×Probe MasterMix | 10 |

| 引物-探针混合液 | 3 |

| 模板DNA/对照 | 7 |

4. PCR扩增程序

预变性：95℃ 10分钟

循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集FAM通道信号）

结果判读

定量分析：以标准曲线计算样品DNA浓度（log值）。

定性分析：

阳性：Ct值<35，呈S型扩增曲线。

阴性：Ct值≥38或无信号。

可疑（35≤Ct<38）：需复检确认。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区分离），避免污染。

试剂使用前需完全溶解并离心混匀。

阳性对照单独存放，避免污染其他组分。

实验后使用10%次氯酸或75%乙醇清洁工作台。

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