大肠杆菌细胞基因组DNA残留探针法荧光定量PCR试剂盒(不含内参) 新品

大肠杆菌细胞基因组DNA残留探针法荧光定量PCR试剂盒(不含内参)

商品属性

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于检测大肠杆菌（Escherichia coli）细胞基因组DNA残留，适用于科研领域。试剂盒通过优化引物与探针设计，确保高灵敏度和特异性，可检测低至50拷贝/μL的DNA，线性范围覆盖5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。

产品特点

即开即用：用户仅需提供DNA模板，无需额外优化反应体系。

高灵敏度与特异性：引物针对大肠杆菌基因组保守区设计，避免与其他微生物DNA交叉反应。

双重检测模式：支持定性（阴阳性判定）与定量（标准曲线法）分析。

防污染设计：提供无传染性阳性对照（10^7拷贝/μL）及专用稀释液，降低假阳性风险。

兼容性：适配多数商业化DNA提取试剂盒，推荐使用带芯枪头操作。

包装规格

| 成分 | 规格 |

| qPCR缓冲液 | 500 μL |

| qPCR酶混合液 | 50 μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 引物-探针干粉 | 50次反应 |

| 阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50 μL |

操作流程

1. 标准曲线制备（定量分析需选做）

稀释阳性对照：按10倍梯度稀释（10^6–10^1拷贝/μL），独立区域操作，避免污染。

标记离心管：依次编号6至1，每管加入45 μL稀释液，逐级稀释5 μL阳性对照。

2. 样本DNA提取

推荐设置阴性对照（NC）与阳性对照（PC），PC为阳性对照1000倍稀释液。

使用兼容的DNA提取试剂盒纯化样本。

3. qPCR反应体系（20 μL）

分区操作：试剂配制、模板添加、扩增需在不同区域进行。

反应程序：

逆转录：50℃ 10 min（若含RNA步骤）；

预变性：95℃ 10 min；

40循环：95℃ 15 sec → 60℃ 60 sec（采集FAM通道信号）。

4. 数据分析

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 39，典型扩增曲线；

阴性：Ct ≥ 40或无Ct值；

灰区（39<Ct<40）：需复测确认。

储存与运输

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；阳性对照单独存放。

样本运输：短期（<7天）2–8℃冰袋运输，长期保存需-70℃（避免反复冻融）。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需严格分区，防止交叉污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照，监控假阴性或污染。

防污染措施：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇清洁台面及移液器。

局限性：

结果受样本质量、提取效率及操作规范影响；

不适用于临床诊断，仅限科研用途。

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