小鼠骨髓瘤细胞基因组DNA残留探针法荧光定量PCR试剂盒(不含内参)

小鼠骨髓瘤细胞基因组DNA残留探针法荧光定量PCR试剂盒(不含内参)

商品属性

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术开发，专用于检测NS0小鼠骨髓瘤细胞基因组DNA残留，适用于科研用途（不可用于临床诊断）。具有高灵敏度、高特异性及宽线性范围（定量检测时线性范围≥5个数量级），可完成50次20μL体系的反应。

产品组分

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |

| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50μL |

| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |

| 试剂四 | PCR引物-探针干粉 | 50T |

| 试剂五 | PCR阳性对照（1×10⁷拷贝/μL） | 50μL |

存储条件：-20℃避光保存，未开封保质期12个月。

操作步骤

1. 标准曲线制备（以10⁶-10¹拷贝/μL梯度为例）

标记6管，依次加入45μL稀释液，按10倍梯度稀释阳性对照（起始浓度1×10⁷拷贝/μL），冰上保存备用。

关键提示：操作需在独立区域进行，避免交叉污染。

2. 样品DNA制备

建议设置N+2个样本（含阳性/阴性对照），使用兼容的核酸纯化方法提取DNA。

3. qPCR反应设置（20μL体系）

定量分析：需N+9个反应管（含6个标准曲线管、1个阴性对照）。

程序参数：

预变性：95℃ 10min；

40循环：95℃ 15sec → 60℃ 60sec（采集FAM通道信号）。

4. 数据分析

定量：以Ct值对标准曲线log浓度作图，计算样品浓度。

定性：Ct≤39为阳性，≥40为阴性；39-40间需复测。

注意事项

防污染：分区分步操作，使用带芯枪头及专用工作服。

质量控制：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤39且扩增曲线典型。

样本保存：短期-20℃，长期-70℃（≤6个月），运输需2-8℃冰袋。

局限性：

结果受样本处理、提取方法及突变影响；

试剂保存不当可能导致假阴性。

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