淫羊藿探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品基本信息

规格：50次/盒（20μL反应体系）

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月，避免反复冻融（≤7次）。

适用范围：科研用途，适用于淫羊藿核酸的定性及定量检测，不可用于临床诊断。

检测原理

基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：

探针设计：针对淫羊藿高度保守基因区域设计特异性引物及探针，探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。

信号释放：PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。

实时检测：通过荧光定量PCR仪监测扩增过程中的荧光强度变化，实现靶序列的定性与定量分析。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶、Taq酶等 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 标准品稀释及阴性对照制备 |

| 引物混合液 | 100μL | 特异性扩增靶序列 |

| TaqMan探针 | 50μL | 荧光信号标记 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备及质控 |

| 说明书 | 1份 | 操作流程及注意事项 |

实验步骤

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记6管，依次稀释阳性对照（10⁷~10²拷贝/μL），独立操作避免污染。

2. 样本RNA提取

建议设置阴性对照（NC，超纯水）和阳性对照（PC，稀释后的标准品）。

使用兼容的RNA提取试剂盒，避免DNA污染。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA/DNA | 5 |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 1 |

| 预变性 | 94℃ | 10 min | 1 |

| 扩增 | 94℃ | 15 sec | 40 |

| | 60℃ | 1 min | （采集FAM信号） |

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct≥40或无扩增。

可疑（35<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

质控要求：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30。

仪器兼容性：适用于ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光PCR仪。

废弃物处理：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面及移液器。

声明：本产品仅限科研使用，严禁用于临床诊断或其他非科研用途。

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